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目的:NT-3联合神经干细胞较单纯神经干细胞移植是否更能促进脑瘫的神经功能恢复。 方法:进行大鼠胎脑皮层组织NSCs的体外培养、传代、NESTIN染色鉴定。然后将培养好的神经干细胞制成单细胞悬液,待移植用。将购自新疆自治区疾控中心动物研究所的7日龄内的wistar大鼠70只采用随机数字表法将其分成四组:正常组、脑瘫组、单纯神经干细胞移植组、NT-3联合神经干细胞移植组。采用经典模型方法制备大鼠脑瘫模型。正常组老鼠不给予任何干预措施。剩余三组均采用经典模型方式建造成模型,脑瘫组造模后不给任何干预。单纯神经干细胞移植组在手术后第三天行神经干细胞移植。NT-3联合NSC组则是在手术后第三天行NT-3和神经干细胞共同移植大鼠侧脑室内。移植后三周进行行为学(水迷宫测试)、神经电生理检查,最后断头取脑石蜡切片,行HE以及免疫组化染色,同时取材行电镜检查。 结果:体外培养胎脑皮层组织3天时可见团状细胞球,NESTIN染色提示阳性,说明正是神经干细胞。神经电生理:CMAP波幅:正常组12.74±1.70脑瘫组3.844±1.217,移植组5.218±1.976,NT-3联合NSC组7.512±2.152,(p<0.05)有统计学意义。潜伏期:正常组4.50±0.37脑瘫组5.729±0.755,移植组5.197±0.709,NT-3联合NSC组4.638±0.720,(p<0.05)有统计学意义。水迷宫测试:4周时,NSC移植组老鼠潜伏期较脑瘫组潜伏期明显减少,(p<0.05)有统计学意义;NT-3联合神经干细胞组则潜伏期较NSC移植组潜伏期更短且有统计学意义;8周时,各组老鼠交同组4周时潜伏期减少;NT-3联合组较单纯NSC移植组潜伏期减少,移植组较脑瘫组潜伏期缩短,(p<0.05)有统计学意义。HE:正常组脑室周围白质结构整齐,无囊变、坏死;脑瘫组脑室旁组织结构破坏,纤维结构紊乱,可见多个不规则囊腔;神经干细胞移植组脑室旁正常组织结构有所恢复,囊变较脑瘫减少;NT-3移植组组织结构恢复更好,脑室旁结构基本正常,除偶尔见瘢痕组织外,无囊变、坏死等变化。免疫组化:脑瘫组较正常组侧脑室周围白质区胶质细胞阳性细胞数增加,少突胶质细胞阳性细胞数减少。NSC移植组较脑瘫组胶质细胞数量有所减少,但是较正常组仍稍高。NT-3联合组胶质细胞数量明显减少跟正常组基本一致,无显著差异。透射电镜:正常组脑室周围细胞线粒体结构正常,未见染色质浓缩、异染,细胞膜双层结构清晰,线粒体、内质网等细胞器结构正常。未见髓鞘纤维形态异常。脑瘫组:线粒体肿胀,核染色质浓缩,异染,核仁固缩电镜下亦可见脑瘫组小鼠神经细胞水肿,双层结构不清,线粒体肿胀,膜部分缺失,有粗面内质网颗粒消失现象,溶酶体增多,核染色质浓缩,凝聚、边集,髓鞘纤维形态不规则,排列松散。NSC移植组可见细胞肿胀程度较脑瘫组明显减轻,线粒体肿胀亦明显减轻,核染色质浓缩程度减少,髓鞘纤维形态稍有不规则,排列稍松散。NT-3联合移植组可见细胞结构同正常组基本无差别,结构层次清晰,偶尔见细胞器碎片。 结论:NT-3联合神经干细胞能更进一步地促进脑瘫的功能恢复,为临床及以后进一步研究提供一定基础。