实验背景 经皮冠状动脉成形术及支架置入术已成为冠心病治疗的主要手段之一，但术后再狭窄率高达20％-30％，极大的影响了它的临床疗效。近二十年来，人们尝试了各种方法，如药物治疗、基因治疗、血管内放射治疗、支架药物涂层等，但均未有可信的证据表明哪种方法能够成功地防治再狭窄。最近我科首先提出利用恒磁场预防再狭窄。我们将支架磁化，与普通支架对比进行了单中心、小型的临床实验，初步的结果另人满意。 大量实验研究及临床观察表明冠状动脉腔内血管成形术后再狭窄的形成机制主要是血栓形成、内膜增厚和血管重构，而支架后再狭窄的发生原因主要是内膜的增殖。在这些过程中，内皮细胞的损伤、修复及功能改变扮演着重要角色。促进内皮细胞修复也必将有利于再狭窄的防治。基于以上情况，本实验以内皮细胞为着手点，探讨了恒磁场对内皮细胞的增殖、迁移及凋亡等方面的影响，观察了磁化支架对猪的冠脉损伤后内膜增殖的作用。 方法与内容 实验第一部分是本研究的核心，主要内容有：探讨了不同剂量的恒磁场对人脐静脉内皮细胞及兔主动脉内皮细胞增殖的影响：利用Westem Blot ＄－IkLqq＋MI 观察了小剂量恒磁场对人脐静脉内皮细胞VEGF表达的影响；研究了 Geulstein（酪氨酸激酶抑制剂）及 L－NAME（一氧化氮合酶抑制剂）在恒 磁场调节内皮细胞增殖中的作用；并利用内皮细胞条件培养基研究了小剂 量恒磁场对内皮细胞旁分泌调节血管平滑肌细胞的影响。最后观察了不同 剂量恒磁场对人脐静脉内皮细胞迁移的影响。 实验的第二部分是第一部分的延续。主要探讨了恒磁场对钙离子（第二 信使）的作用。在这一部分我们应用FIOO－3仇M的负载技术及激光扫描共 聚焦显微镜观察了恒磁场对人脐静脉内皮细胞内游离钙离子浓度的影响； 利用膜片钳全细胞记录的方法，研究了恒磁场对钙离子通道的影响。这一 部分的研究目的在于探讨恒磁场作用于内皮细胞的信号转导途径，阐明恒 磁场影响内皮细胞增殖的机制。 实验的第三部分主要观察了不同剂量恒磁场对人脐静脉内皮细胞活性 的影响。主要内容包括利用透射电镜观察了不同剂量恒磁场对人脐静脉内 皮细胞超微结构的影响；应用流式细胞仪、TUNEL法及透射电镜研究了不 同剂量磁场对内皮细胞凋亡的作用。这部分的研究目的在于探讨恒磁场应 用的安全范围。 实验的第四部分从炎症反应的角度研究了恒磁场对内皮细胞的生物学 效应。主要内容包括：恒磁场对肿瘤坏死因子口诱导的单核细胞与内皮细 胞粘附的影响；利用流式细胞仪及ELSIA法观察了恒磁场对肿瘤坏死因子 口诱导的人脐静脉内皮VCAM－1表达的作用。 实验的第五部分是前四部分体外实验在体内的验证，也是本研究的最 终目的。我们以猪的冠状动脉为研究对象，观察了磁化支架对猪冠脉损伤 后内膜增殖的防治作用。 结果与结论 1、恒磁场对人脐静脉内皮及兔主动脉内皮增殖的影响与磁感应强度有关， －5 ＄·ftLtq＋WA 0．SGs的磁场促进内皮细胞的增殖，IGs的磁场对内皮细胞增殖无明显影 响；10、50、100、300、600、1000 GS的磁场抑制内皮细胞的增殖。磁场 对内皮细胞的促增殖作用依赖于NO及酪氨酸激酶途径。0．SGs的磁场促 进人脐静脉内皮细胞 VEGF的表达，而 10Gs的磁场抑制 VEGF的表达。 2、0．5、l、10GS组的磁场促进内皮细胞 NO的分泌，0．SGS磁场条件下制 备的内皮细胞条件培养基对血管平滑肌细胞的促增殖作用减弱。 3、0．SGS及IGS的磁场促进内皮细胞的迁移。 4、0．SGS的磁场可以提高内皮细胞内的游离钙离子浓度，IGS磁场对内皮 细胞钙离子浓度无明显影响，10Gs的磁场降低了内皮细胞内的游离钙离子 的浓度。 5、0．SGS的磁场可以促进钙离子通过内皮细胞上的非选择性的阳离子通道 进入内皮细胞，IGS的磁场对此无明显作用，10Gs的磁场则抑制了钙离子 通过内皮细胞上的非选择性的阳离子通道进入内皮细胞。 6、0．SGS，IGS磁场对培养的人脐静脉内皮细胞是安全的，不引起变性及 坏死。但当磁场的磁感应强度大于10Gs时，对培养的内皮细胞具有毒害作 用。10GS的磁场可使部分细胞发生变性。50GS的磁场不但会导致细胞变性、 坏死，还引起细胞的凋亡。 7、0．5及IGS的恒磁场可以抑制hFQ诱导的单核细胞与人脐静脉内皮．细胞的粘附，降低 hF Q诱导的内皮细胞 VCAM－l表达。10GS的恒磁场促