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目的:辐射引起的皮肤损伤是癌症放射治疗患者最常见的并发症。趋化因子CCL27（CCL27）介导皮肤免疫炎性反应在调节辐射诱发皮肤损伤中起着重要作用。分泌CCL27的皮肤角质细胞（Ha Ca T）特异性表达可形成间隙连接的Connexin26（Cx26）,这是传输辐射损伤信号的重要方式之一。Cx26还与MAPK通路和NF-κB/COX-2通路相互作用,而后者参与调节CCL27的产生和分泌。以上这些研究结果表明,Cx26可能参与调节辐射诱导CCL27的分泌。本研究将探讨不同Cx26表达水平对体外辐射后CCL27分泌的影响。同时,我们将研究参与CCL27表达的Cx26和相关通路蛋白的相互作用,并且通过研究Cx26与小鼠模型中辐射诱发皮肤损伤的关系,以确认体外研究的结果。方法:在这项研究中,将分泌CCL27的人类皮肤角质细胞（Ha Ca T）用0、1、2、3、5Gy不同剂量X射线进行照射。Western Blot检测与Cx26相关MAPK信号通路蛋白和分泌相关蛋白CCL27的表达,克隆形成实验、微核实验和ELISA检测细胞辐射敏感性。通过CRISPR/Cas9质粒构建敲除Cx26表达的Ha Ca TCx26-/-细胞,以检测Cx26表达水平不同对CCL27分泌的影响。并通过小鼠模型实验,在动物个体水平上验证辐射引起的皮肤损伤中CCL27的分泌变化及Cx26对其变化的影响。结果:Ha Ca T细胞和Ha Ca TCx26-/-细胞用不同剂量的X射线照射后,Western Blot实验显示,随着Ha Ca T细胞辐射剂量增加,CCL27的表达没有明显变化（独立样本T检验p>0.05）,但p-ERK/ERK、p-p38和NF-κB蛋白的表达水平随着辐射剂量增加而增加。其中Cx26敲除的Ha Ca TCx26-/-细胞中p-ERK/ERK、p-p38和NF-κB蛋白表达水平要低于Cx26表达正常的Ha Ca T细胞,在3Gy和5Gy时有显著差异（单样本方差分析p<0.01）。同时,ELISA检测结果显示CCL27胞外分泌明显增加,并且在Ha Ca T细胞中上升趋势比Ha Ca TCx26-/-细胞中更显著（独立样本T检验p<0.05）。克隆形成和微核实验结果表明,辐射剂量增加,细胞存活率降低,微核形成率提高。相比较之下,Ha Ca TCx26-/-细胞辐射敏感性更低。动物个体实验结果表明,小鼠经过急性和累积照射后出现不同程度皮肤损伤和炎症,其中急性照射组小鼠表皮厚度变薄而累积照射组表皮增厚;ELISA检测发现急性照射组小鼠皮肤组织中CCL27分泌减少而累积照射组CCL27分泌增多;免疫组化结果显示辐照后小鼠皮肤组织中CCL27表达均呈增加趋势。结论:结果表明,Ha Ca T细胞辐照后,MAPK和NF-κB信号通路被激活,CCL27分泌增加,Cx26表达低的细胞Ha Ca TCx26-/-辐照后存活率较高,微核形成率和放射敏感性较低。这些发现表明,Cx26可能参与了辐照后皮肤角质细胞中激活MAPK信号通路和NF-κB/COX-2信号通路,从而诱导CCL27的分泌。