杆状病毒在极晚期基因表达过程中,产生两种高效表达的蛋白,它们是多角体(Polh)蛋白和P10蛋白,其中多角体蛋白是形成多角体的主要成分,基因序列大小为738 bp,编码246个氨基酸残基,分子量大小为29 kD,多角体启动子是高效启动子,因此多角体蛋白的表达量很高。感染后期在细胞中的积累可高达30%-50%,形成晶体结构,称为多角体,这种多角体晶体经过低速离心即可沉淀下来,并且它在碱性条件下能溶解。这些独特的性质对于多角体蛋白融合表达与纯化外源蛋白是非常有利的。基于多角体的以上特性,从本实验室构建的家蚕cDNA文库中获得一个新的编码家蚕免疫相关蛋白(immune-related protein)的基因,将其命名为BmIRP(GenBank:NM_ 001098349.1)该基因全长为775 bp, ORF大小为516 bp,编码172个氨基酸残基,预测分子量为18.4 kD,将BmIRP与多角体基因(Polh)融合,中间连上一个TEV酶切位点,克隆到融合表达载体pET-28a相应的酶切位点,构建了重组pET-28a-Polh-BmIRP,将重组质粒转入E.coli BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE 及Western blotting鉴定发现一条特异性条带,与重组pET-28a-BmIRP相比,融合多角体基因表达量明显提高。表达出来的多角体融合蛋白形成了多角体结构,具有与天然多角体一样的特性,在pH 11.0的条件下能大量溶解,当pH值调至7.4左右,融合蛋白又沉淀下来,通过不同pH值的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液进行梯度洗涤融合蛋白,即可纯化融合蛋白,纯度达92%。经MALDI-TOF-MS鉴定纯化的蛋白为Polh-BmIRP融合蛋白,在扫描电镜下观察,融合蛋白呈现出与天然多角体相同的多面体结构。同时,尝试利用Bac-to-Bac家蚕杆状病毒表达系统高效表达融合蛋白,在家蚕BmN细胞中成功表达了该融合蛋白。这种融合表达方式可用来高效表达外源基因及简便地纯化目的蛋白。对BmIRP蛋白进行生物信息学分析、结晶条件的初步探索、RNAi研究及组织转录水平分析,为今后研究该蛋白的结构与功能奠定了一定的基础。