论文部分内容阅读
小檗碱(BBR)作为传统小分子药物,具有多种药理活性,最近的研究显示BBR还具有神经保护和抗肿瘤的作用。BBR能够作用于脑卒中,促进脑卒中后的神经修复;而PPAR-γ对于脑缺血复灌损伤后机体的炎症反应的降低、细胞凋亡的抑制以及神经细胞的修复等具有调节作用,参与了缺血复灌后的神经保护。那么BBR调控神经保护作用的具体机理是什么,是否与PPAR-γ的功能相关,我们对此进行了研究。我们分别构建了小鼠双侧颈总动脉结扎再灌损伤的体内模型和C17.2细胞体外缺糖缺氧复灌(OGD)的体外模型。首先,通过细胞形态观察和MTT检测的方法,证实了BBR对小鼠脑缺血再灌和C17.2细胞OGD损伤具有保护作用;其次,利用实时荧光定量PCR和WB的检测,我们发现抑制PPAR-γ活性后,BBR的保护作用显著减弱,说明了BBR的保护作用主要是通过PPAR-γ的功能而实现的。同时,我们发现BBR在生理条件下降低PPAR-γ的表达,而在OGD条件下又可以导致PPAR-γ的更高表达。这种在OGD处理前后,BBR对PPAR-γ的表达作用呈现不一样的机制,说明了生理和病理条件下BBR调控的差异。再次,研究显示大脑缺血再灌损伤后DNA甲基化发生大量增加,并且甲基化酶在大脑中高表达,说明了表观遗传修饰对于神经损伤的重要调控作用。为了探究生理和病理条件下BBR调控的差异性,我们分析了BBR对DNA的甲基化调控。在体外模型中,OGD处理引起全基因的甲基化水平增加,而BBR能有效降低甲基化水平。具体而言,BBR能够下调OGD引起的甲基转移酶(Dnmt1、Dnmt3a)表达的增加,降低总体甲基化水平变化,从而有助于促进一些神经保护通路基因的转录。最后,我们研究了BBR对PPAR-γ的调控机理,一方面BBR在生理条件下通过作用于TATA box下调PPAR-γ的表达;另一方面,BBR还抑制了OGD后PPAR-γ的甲基化,进一步促进PPAR-γ的表达。综上,BBR在大脑缺血复灌后的神经保护机制主要是通过干预DNA甲基化的增加和调控PPAR-γ的表达而实现的。这一工作为探讨BBR调控PPAR-γ基因的表达、防治脑缺血再灌损伤提供了重要的实验依据。其它工作部分我们还研究了BBR的转运机制及其抗肿瘤作用,采用不同肿瘤细胞研究BBR的转运机制,并证实了BBR对P-gp的调控的组织细胞特异性。