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本实验通过猪与人TNF-α基因序列相似性的比对,及与猪miR-369第2-8位种子序列相匹配的靶位点的寻找和对比,预测猪miR-369同样调节TNF-α基因的表达。为了验证这一结果,本实验利用双荧光素酶报告基因系统去检测猪miR-369与TNF-α基因的靶标关系。结果显示：(1) TNF-α基因在人、猪、大鼠、小鼠、牛和家兔中,均具有较高的相似性,其中猪与牛的相似性最高,与人次之。(2)猪与人的TNF-α基因中,3’UTR区域含有相同核苷酸数目(34 nt)的AREs,且相似性极高。经miR-369第2-8位种子序列碱基匹配预测,在AREs区域两者含有两个相似性极高的miR-369的靶位点。(3)野生型重组质粒(WT)和突变型重组质粒(MT)构建成功,即野生型的AREs序列和靶位点突变的突变型AREs序列均按正确方向,成功地连接到了双荧光素酶报告基因质粒载体psiCHECKTM-2上。(4)在对猪髋动脉内皮细胞(PIEC)进行转染时,只有当细胞生长融合度到90%,mimics (miRNA模拟物)与质粒载体共转染的最终浓度分别为50 nM和150 ng时,才能达到最优的转染效果。(5)单转染的突变型重组质粒(MT)与野生型重组质粒(WT)相比,差异极显著,P<0.01,即MT的荧光比值极显著高于WT的荧光比值,表明AREs影响mRNA的稳定性。由于MT比WT少了三个连续的AUUUA五聚体,说明AUUUA五聚体与mRNA稳定性密切相关,且推测mRNA的稳定性可能与AUUUA五聚体的连续性成正相关。即相同个数的AUUUA五聚体,连续性越好,其影响mRNA稳定性越强；连续性越小,其影响mRNA稳定性越弱。(6) miRNA过表达时(C组,mimics+WT),其荧光比值极显著低于对照组(control, WT), P<0.01,表明ssc-miR-369抑制了海肾荧光素酶的表达,即ssc-miR-369下调TNF-α基因的表达。(7) miRNA抑制时(D组,inhibitor+WT),其荧光比值与对照组control相比,P>0.05,差异不显著；与C组相比,P<0.05,差异显著。进一步证实了miR-369对TNF-α靶基因的下调作用。(8)在转录后水平调节mRNA的过程中,AREs与miRNA具有一些相似之处。但当共处时,它们的调节作用互不干扰,或者说影响很少,即使当miRNA的靶位点位于AREs区域中时也一样。(9)本研究的成功表明了一种筛选动物功能基因的新的途径,能更好地把人类和小鼠等物种上的取得的一些研究成果借鉴到我们动物生产上来,同时本研究还可能为AREs (AU-rich elements)和miRNAs(微小RNA, microRNA)的基础研究提供了一些有用的参考数据。