论文部分内容阅读
目的本研究通过体外模拟缺氧微环境,旨在研究缺氧条件对骨髓来源内皮祖细胞(BM-EPCs)形态学、抗凋亡能力、体外血管形成能力等生物学功能的影响.方法1、无菌条件下分离6-8周龄(180-220g)雄性Wistar大鼠四肢长骨,PBSE冲洗骨髓腔至白色透亮,经密度梯度离心法获得大鼠骨髓来源单核细胞,接种在包被有大鼠玻连蛋白的10cm培养皿中,加入特定内皮细胞生长培养基-2。2、随机分为常规培养组和缺氧培养组,常规培养组于常规(37℃、5%CO2)条件下培养7d；缺氧培养72h、48h、24h组分别于常规(37℃、5%CO2)条件下培养4d、5d、6d后,缺氧(1%O2+5%CO2+94%N2)条件下继续培养72h、48h、24h。3、细胞形态观察、细胞表面标志物CD34+/CD133+双阳性标记检测、Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素-1共同染色,三种方法共同鉴定常规培养至第7天的BM-EPCs细胞。4、分别观察常规培养组、缺氧72h组、缺氧48h组、缺氧24h组细胞形态学变化,并对以上各组细胞进行内皮分化功能检测(Matrigel Assay)-.抗凋亡检测(Annexin V/PI),比较各组细胞生物学功能变化差异,明确缺氧条件对BM-EPCs的功能影响。结果1、成功分离并获得各组培养至第7天的大鼠骨髓来源内皮祖细胞,BM-EPCs细胞吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素-1,双荧光染色细胞阳性率为(90%±4%),细胞表面标志物CD34+/CD133+双阳性率为(86%±2%)。2、随着缺氧处理时间的延长,BM-EPCs早期凋亡率明显增加。与常规培养组(0.89±0.20)%相比,缺氧培养24h组早期凋亡率(1.33±0.07)%改变不明显(P>0.05),缺氧培养48h组(3.25±0.12)%、72h组(7.48±1.53)%,早期凋亡率明显增加(P<0.05)。3、随着缺氧处理时间的延长,BM-EPCs体外血管形成能力变化明显。与常规培养组比较,缺氧培养24h组的体外血管形成能力增强(P<0.01),缺氧培养48h、72h组体外血管形成能力明显下降(P<0.01)；与缺氧培养24h组比较,缺氧培养48h、72h组体外血管形成能力明显下降(P<0.05)。结论缺氧预处理BM-EPCs24h, BM-EPCs早期凋亡率增加不明显,细胞体外血管形成能力明显增强。