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肿瘤已成为威胁人类健康的一大杀手，但是目前还没有十分有效的治疗方法。传统的化疗药物在杀死癌细胞的同时也会将体内正常细胞一并杀死，引起较大的毒副作用，患者存活率较低。采用小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）对癌症进行基因治疗是目前研究热点之一。但细胞膜作为天然屏障成为siRNA进入细胞内的主要障碍，因此研究可携带siRNA的穿膜载体十分重要。细胞穿膜肽（cell-penetratingpeptides，CPPs）是一种可携带基因或蛋白质等大分子药物进入细胞的载体，但其与药物形成的复合物缺乏靶向性，且稳定性不高，使其应用受到限制。目前提高肿瘤靶向治疗的主要策略是针对肿瘤细胞相关抗原(tumor-associatedantigens，TAAs)对载体材料进行修饰，使其对肿瘤细胞具有更高的选择性，借此提高肿瘤细胞对基因或药物的摄入。近年来，有研究表明促黄体激素释放激素(luteinizing-hormone-releasinghormone，LHRH)受体在人肝癌细胞表面过量表达，而在正常肝细胞未有可检测到的表达。
本研究选用了可以将siRNA携带至细胞内并定位于细胞质中的一种CPP——MPG△NLS，将其与具有肝癌靶向性的多肽LHRH连接，形成新型融合多肽LHRH-MPG△NLS，研究该融合多肽对人肝癌细胞的转染效率和靶向性，以考察该融合多肽作为靶向肝癌siRNA载体的可行性。本研究主要分为以下几个部分：
1．研究在不同N/P比时多肽与siRNA的结合情况。凝胶电泳结果显示：当N/P大于10∶1时LHRH-MPG△NLS可完全阻滞siRNA。
2．探索制备稳定的LHRH-MPG△NLS/siRNA复合物的方法。对不同N/P和不同pH值的溶液中形成的复合物的粒径大小进行检测，并通过较长时间观察其粒径大小的变化对稳定性进行考察。结果显示：N/P在10∶1～20∶1之间和溶液pH在7.0～8.5之间时，形成的复合物的大小均在150nm～250nm之间，室温下具有良好的稳定性，20天内未发生明显的聚集。
3．采用荧光标记的siRNA制备不同N/P的LHRH-MPG△NLS/siRNA复合物，分别以50nmol/L、100nmol/L和200nmol/L的浓度转染人肝癌细胞(HepG2)和人正常肝细胞(L02)，通过高内涵细胞分析系统探索最佳转染条件和考察该多肽载体是否具有靶向性。结果显示转染的最佳N/P条件为20∶1，浓度为200nmol/L，转染时间为24小时；LHRH-MPG△NLS/siRNA复合物在相同条件下进入HepG2细胞的量大于进入L02细胞的量(p＜0.05)，具有较好的靶向性。
4．用LHRH-MPG△NLS携带对人GAPDH基因的有明确沉默效果的siRNA转染HepG2细胞和L02细胞，通过反转录一聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR)确定两种细胞中基因的沉默效果。结果显示：转染后，HepG2细胞中GAPDH基因的表达较L02细胞中GAPDH基因表达少，进一步说明LHRH-MPG△NLS具有靶向肝癌细胞的能力。
5．通过WST-1实验对LHRH-MPG△NLS/siRNA复合物的毒性进行检测，结果显示该复合物在30nmol/L、50nmol/L、100nmol/L和200nmol/L对细胞进行转染时，活细胞比率均在90％以上，与同等浓度的商业化脂质体Lipofectamine2000比较毒性较小，差异具有统计学意义。