论文部分内容阅读
目的探讨氟非尼酮(FD)抑制NALP3炎性体和阻断IL-1R1/MyD88通路的活化,多靶点抑制博来霉素所致小鼠肺纤维化模型的炎症反应,发挥早期抗肺纤维化作用的机制。方法1、80只C57BL/6小鼠适应性喂养1周,随机分为5组：生理盐水对照组(Control).BLM模型组(BLM)、BLM模型组+FD治疗组(FD)、BLM模型组+Z-YVAD-FMK治疗组(Cpl inhibitor)、BLM模型组+Anakinet治疗组(IL-1Ra),每组动物16只。2、采用气管内注入BLM (5mg/kg)法复制小鼠肺纤维化动物模型,分别给予FD (500mg/kg,造模前24小时灌胃给予,1次/天)、caspase-1抑制剂(YVAD-FMK,10mg/kg,造模前8小时和4小时腹腔分别给药1次)、IL-1R抑制齐(IL-1Ra,100ug,2次/天,造模前24小时腹腔给予)处理小鼠,BLM处理的第2天和第14天分别处死动物,左肺组织病理切片行HE和Masson染色；右肺组织迅速液氮保存,Real time PCR测定肺组织IL-1β、MCP-1、MPO、IL-6、 α-SMA、Fibronectin、Collagen Ⅰ mRNA表达水平；ELISA检测肺组织匀浆IL-1β、MCP-1、MPO和IL-6蛋白表达水平；Western blot检测肺组织caspase-1、IL-1R1、MyD88、α-SMA和Fibronectin蛋白表达。结果1、BLM处理的第2天及14天,BLM模型组肺组织大量的炎性细胞浸润,肺泡炎评分明显高于对照组(P<0.001)；经FD、Cp1inhibitor、IL-1Ra治疗后,肺组织中炎性细胞浸润明显减少,肺泡炎评分均显著下降(P<0.001)。2、 BLM处理的第14天,BLM模型组肺组织见大量的胶原沉积,肺泡结构破坏,肺纤维化评分明显高于对照组(P<0.001)；经FD、Cp1inhibitor、IL-1Ra治疗后肺组织中胶原沉积明显减少,肺纤维化评分均明显下降(P<0.001),治疗组之间无显著性差异。3、BLM处理的第2天和第14天,ELISA和/或Real-time PCR结果显示：BLM模型组IL-1β、MCP-1、MPO、IL-6的蛋白和/或mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.001)；经FD、Cp1inhibitor、 IL-1Ra治疗后IL-1β、MCP-1、MPO、IL-6的蛋白和/或mRNA表达水平显著下降(P<0.05)；FD对IL-6的蛋白抑制作用强于Cplinhibitor (P<0.05)。4、 BLM处理的第14天,Western Blot和/或Real-time PCR结果显示：BLM模型组α-SMA、Fibronectin、Collagen Ⅰ的蛋白和mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.01)；经FD、Cp1inhibitor、IL-1Ra治疗后α-SMA、Fibronectin、Collagen Ⅰ的蛋白和mRNA表达水平显著下降(P<0.05),FD对α-SMA、Fibronectin的蛋白抑制作用强于Cp1inhibitor(P<0.05)。5、BLM处理的第2天及14天,Western blot结果显示：BLM模型组活性的caspase1、IL-1R1、MyD88蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.001)；经FD、Cp1inhibitor治疗后活性的caspasel蛋白表达水平显著下降(P<0.01),两治疗组间无统计学差异；经FD、IL-1Ra治疗后IL-1R1、MyD88蛋白表达水平显著下降(P<0.01),两治疗组间无统计学差异；而经IL-1Ra不能抑制活性的caspase1蛋白表达(P>0.05),经Cp1inhibitor不能降低IL-1R1、MyD88蛋白表达水平(P>0.05)。图：40幅,表：19个,参考文献：37篇。结论：1、氟非尼酮可以减轻BLM诱导的小鼠早期肺炎症及纤维化。2、氟非尼酮抑制NALP3/IL-1R1/MyD88通路减轻BLM诱导的小鼠肺炎症及纤维化。