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目的比较脂肪干细胞在BMP-7存在时平面培养和微团培养两种方式下诱导分化成软骨细胞的情况,探讨不同培养方式对脂肪干细胞成软骨能力的影响。寻求一种更好的促进脂肪干细胞成软骨分化的培养方式。方法细胞的分离和扩增,选用6周龄健康Wistar雄性大鼠,无菌条件下取大鼠双侧腹股沟脂肪组织,眼科剪剪碎,0.1%的胶原酶37度震荡消化20分钟,含10%胎牛血清的DMEM终止消化,1500g离心10min,含10%胎牛血清的DMEM重悬,接种于培养瓶中培养。每3天换液一次,待细胞生长至接近融合时胰酶/EDTA消化传代。将培养至第3代细胞胰酶/EDTA消化后计数,调整密度为1×10~5/ml,在BMP-7存在条件下进行平面和微团培养。指标检测(1)光镜观察原代脂肪干细胞及诱导7,21天后的生长情况,流式细胞学检测脂肪间充质干细胞的表面标志;(2)MTT法检测不同培养方式下脂肪干细胞的增殖能力;(3)免疫组织化学染色检测培养三周后两组Ⅱ型胶原表达,RT-PCR检测诱导14,21天后平面和微团培养组软骨特异蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mRNA的表达及肥大软骨细胞的标志X型胶原mRNA的表达。结果脂肪干细胞的形态特征原代脂肪干细胞接种24小时后光镜下可见有少量的细胞贴壁,形态为短梭形或多角形,48小时后贴壁细胞明显增多,约9天左右细胞融合超过90%。诱导7天后平面培养组细胞呈长梭形,微团培养组呈短梭形。诱导21天后两组细胞形态均为圆形。流式细胞仪检测表明,脂肪间充质干细胞高表达CD29和CD44,而CD34,CD45的表达均不足2%。MTT检测结果表明平面培养组细胞增殖趋势平缓,10天左右进入平台期。而微团培养组各检测点MTT值均显著高于平面培养组,二者统计学有显著性(P＜0.05),表示微团组细胞的增殖要明显快于平面培养组,且微团培养组从生长曲线上看未见明显的平台期。免疫组化结果显示,培养三周后微团组Ⅱ型胶原表达强阳性而平面组表达弱阳性,RT-PCR结果显示培养14和21天后两组均有软骨特异蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mRNA的表达,但微团组表达较强。而微团组培养21天时其X型胶原mRNA的表达弱于平面组。结论在BMP-7诱导下脂肪干细胞可以向软骨细胞分化,同时微团培养比平面培养更能促进脂肪干细胞的增殖、分化,并能更好的维持软骨细胞的表型,可以作为组织工程构建软骨的理想选择。