目的:探讨逃逸线粒体DNA通过TLR9-MyD88-NFκB信号通路加重机械牵张诱导的A549上皮细胞损伤的作用机制。方法:将未处理和用慢病毒转染或药物处理的A549细胞放置于具有5%或20%张力的机械循环拉伸(Cyclic stretch,CS)的机械牵张仪中。通过PINK1 siRNA和cDNA的慢病毒转染调节PINK1的表达。通过选择性激活剂ODN 1668和抑制剂ODN 2088调节A549细胞中TLR9的激活和抑制,选择性抑制剂ST 2825阻断MyD88的表达。将培养后的A549细胞随机分为10组(n=8):空白对照组、5%CS组、20%CS组、PINK1 siRNA慢病毒转染+20%CS组、PINK1 cDNA慢病毒转染+20%CS组、PINK1阴性对照慢病毒转染+20%CS 组、ODN2088+20%CS 组、ODN1668+20%CS 组、ST2825+20%CS 组。采用 Western-blot 和 RT-PCR 技术检测蛋白和 mRNA的表达,透射电镜观察CON组、5%CS和20%CS组的细胞损伤情况,ELISA检测CON组、5%CS和20%CS组的TNF-α、IL-6、IL-1β炎症因子水平,Stub-RFP-Sens-GFP-LC3B慢病毒载体转染A549细胞以检测自噬流的变化。结果:在本研究中,与空白对照组和5%CS组相比,20%CS组中的IL-1β,IL-6和TNF-α的水平显着增加。在20%CS下,过表达PINK1 cRNA慢病毒组中,Parkin,LC3B-Ⅱ,p-NF-κBp65和COX-Ⅳ表达量明显增高,Mfn1表达明显减少;而在抑制PINK1 siRNA慢病毒组中,Mfn1表达量明显增加。在20%CS中,TLR9的上调增加了 MyD88和p-NF-κBp65的表达水平,但COX-Ⅳ在对照组、阴性对照慢病毒组、MyD88抑制组、TLR9抑制组和TLR9激活组中表达相似。此外,TLR9和MyD88的抑制均减弱了在20%CS下A549细胞mtDNA诱导的炎症反应。结论:20%循环张力的机械牵张会激活PINK1/Parkin介导的线粒体自噬以释放mtDNA,然后通过TLR9-MyD88-NFκB信号通路途径加重A549细胞损伤和炎症反应。