水稻籼粳杂种不育基因Sc的精细定位与候选基因的功能鉴定

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:khsim
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该研究在前人研究的基础上,利用国际公共数据库公布的有关序列信息,对花粉不育基因座Sc作进—步的精细定位,并对其中的几个ORF进行序列分析及利用RNA干涉方法对其进行功能鉴定.该研究主要结果如下:1.根据该研究的测序结果和利用国际公共数据库公布的水稻基因组序列信息,发展了12个与Sc紧密连锁的Del/In和SNP标记.2.构建了台中65近等基因系E5的基因组TAC文库,文库包含76800个单克隆,平均插入子为40 kb,文库大小覆盖水稻单倍体基因组的7倍左右.3.用覆盖Sc基因座的2个探针对E5TAC68基因组文库进行筛选,共获得10v个可能包含Sc的阳性克隆.4.根据公共数据库的基因预测系统,在定位区域内预测到6个ORF,并对其中的3个ORF即ORF2(自我吞噬蛋白基因)、ORF3(含ACT结构域基因)、和ORF6(含锌指结构的gag/pol基因)进行了亲本间的序列测定分析.5.对在Sc基因座携带有不同基因型的4份野生稻(包括3份普通野生稻WS28、WS29、WS59和—份尼瓦拉野生稻WS23)分别对ORF2、ORF3和ORF6进行了序列测定.6.将定位区域内包括ORF1、ORF2和ORF6在内的3个候选基因选取目的片段分别进行了RNA干涉载体的组装,并对水稻胚性愈伤进行了农杆菌介导的遗传转化,获得了—批RNA干涉转化苗.除ORF1获得转化苗较晚尚未检测分析外,ORF2和ORF6的RNA干涉转化苗花粉育性均低于50%,以典败、空败为主.遗传转化结果初步表明ORF2、ORF6可能与花粉发育有关.进—步的分析工作正在进行中.通过以上研究,为分离鉴定Sc基因及进—步揭开Sc基因在杂种花粉不育中的分子作用机理打下了基础.
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