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细胞毒素（Cytotoxin,CTX）是眼镜蛇毒中重要的一类活性蛋白，约占蛇毒总蛋白量的40％，由60-63个氨基酸残基组成，分子量6000-7000Da，具有广泛的生物学活性：引起可兴奋性组织如骨骼肌、心肌及神经组织去极化；溶解肿瘤细胞；抑制一些酶的活性，如Na+-K+-ATP酶，Ca2+-ATP酶，蛋白激酶C（PKC）等。不同地区、不同蛇种的蛇毒中含有不同的CTX，且同种蛇毒中也含有2～5个CTX。国内外许多研究证实，CTX在体内外都有抗肿瘤作用，但均侧重于研究某一个CTX，并未对一种蛇毒的几个CTX的抗肿瘤活性及其毒性做一比较。本文从舟山眼镜蛇（Naja atra）毒中分离纯化得到4个CTX，并比较它们的体内外抗肿瘤活性及毒性，旨在筛选出一个高效低毒的CTX，为开发利用提供依据。 1．CTX的分离纯化 采用SP-Sephadex C-25离子交换柱层析，从舟山眼镜蛇粗毒中分离得到14个蛋白峰；其中蛋白峰Ⅹ，Ⅺ，Ⅻ，（？）、可使大鼠离体Langendorff心脏标本收缩幅度降低，最后停搏于收缩期；对大鼠离体膈神经-膈肌标本能直接抑制刺激膈肌引起的收缩。峰Ⅹ～（？）再通过Superdex 75凝胶过滤及Pheny1-Sepharose High Performance疏水层析两步精细纯化，经十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）（Tris-Tricine系统）鉴定均呈单一条带，为均一蛋白， 舟山眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化、抗肿瘤活性及毒性研究计算得分子量分别为：7．284，7．332，7．235，和 7．38IkDa。自动电位滴定法测定 PLA。活力均为 0。由此鉴定峰 X～XIll为 CTX，分别命名为CR－X～Xlll。2．毒性测定 从近似 LDS。及 100％动物死亡的最小剂量肌D俩个方面加以比较。采用Meter氏方法，测定小鼠静脉注射CTXX～XIll的近似LDs。值，结果分别为1＊6士0．12，1．80士0．21，0．75土0．ZI，1．85士0．15pg／g体重。MLD测定采用麻醉大鼠股静脉恒速输注 CTX－X～Xlll，记录心电变化，由（输注速度X出现心律失常时间X药液浓度）／动物体重计算MLD。结果显示：静脉恒速注射一定剂量的CTXK～XIll后，动物均出现严重心律失常而死亡卜心电变化包括ST段压低或弓背向上抬高；T波倒置；阵发性室性心动过速、QRS波畸形，Q波出现；心室扑动J心室颤动等。4个 C’I’X的 MLD值依次为 183士18，310士26，224士16，343128pg／kg；方差分析有显著性差异 ①＜0刀01人综上结果显示，4个＊TX中，＊111毒性最小；其次是XI；X和 Xll毒性较大。3．体外抗肿瘤活性 采用SRB法，分别观察CTX)～Xlll对体外培养的Bel。。细胞（人肝癌细胞株）和HL＊0人类白血病细胞增殖的抑制作用，测定其半数抑制浓度＊C扣＼结果显示CTXX～Xlll对Bel，。和HL60细胞均有较强的抑制作用，呈明显的量效关系。对Bel＊。细胞作用24h的IC5。分别为：2．22士0．28；二＊7士0．10；1．12土0．13；Z．46土 2 舟山眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化、抗肿瘤活性及毒性研究0．28卜g／ml；对 HL－60细胞作用 24h的 IC50分别为：1．97士0＊6；2＊1士0．24；1．61士0．18；2．40士0．30pg／thl；方差分析均有显著性差异 O＜0刀1人综上结果显示4个＊＊X对肿瘤细胞的抑制作用强弱为：Xll＞X＞Xlll＞XI。4．体内抗肿瘤活性 根据毒性实验及体外抗肿瘤实验结果：4个CTX中，Xll体外抗肿瘤活性及毒性最强，Xlll毒性最小，体外抗肿瘤活性较强。我们选择CTX．Xll、Xlll进行体内抗肿瘤实验。体内实验采用腹腔给药对荷子宫颈癌U14（实体瘤）小鼠及艾氏腹水癌（腹水型）小鼠的实验性治疗，测定肿瘤生长抑制率（％人结果显示体内抗肿瘤活性CTX－Xlll＞CTX．Xll。 结论：采用 SP－Sephadex C－25阳离子交换柱层析、S呷erdex 75凝胶过滤及 PhenylSepharose HP疏水层析三步分离得到 4个不含磷脂酶A。的CTX纯品。4个CTX中，X、Xll毒性较强，XI次之，Xlll最弱。CTX《～Xlll对体外培养的肿瘤细胞有较强的细胞毒作用，CTX．Xll＞X＞Xlll＞Xi。对小鼠体内接种的 UI4门鼠子宫颈癌） （实体瘤）及艾氏腹水癌oAC＊腹水型)均有明显的抗肿瘤作用，＊TX．XI 11＞Xll。＊TX－XI 11抗肿瘤作用强，毒性最低。