行有性生殖的生物在配子形成过程中都需要经历减数分裂。因此,减数分裂调控机制是最基础的生物学问题之一,也是水生生物学、细胞生物学、遗传学、生理学、发育生物学、分子生物学等多门学科研究的重点、热点和难点问题。近年来,哺乳类和鸟类减数分裂调控机制研究取得了重大进展。RA减数分裂启动过程中起着决定性作用,而Stra8 (Stimulated by Retinoic Acid gene 8)在减数分裂启动中起着关键作用,是生殖细胞由有丝分裂转变为减数分裂前特异表达的基因。然而,到目前为止,Stra8仅在哺乳类和鸟类报道。尽管在两栖类也发现RA在减数分裂过程中起关键作用,但并未从两栖类分离到Stra8。并且目前,硬骨鱼类的减数分裂机制研究还是一片空白。本研究通过生物信息学的方法,得到3种鱼类(沟鲇、虹鳟、大马哈鱼)的Stra8同源基因。通过RT-PCR和RACE相结合的方法从南方鲇(Silurus meridionalis)成功克隆了Stra8全长cDNA序列；用RT-PCR的方法对Stra8在南方鲇各组织的表达模式进行了研究；用Pcold I载体在大肠杆菌对南方鲇Stra8进行了原核表达、重组蛋白的纯化以及在小鼠中进行了抗体制备；采用荧光素酶-报告基因系统研究了雌激素和一系列在性别分化中起重要作用的转录因子,如Sf1、Foxl2、Dmrt1、Wt1等对Stra8的转录调控作用。结果如下：本研究克隆了南方鲇Stra8的cDNA序列全长为1606 bp,包括5′端非编码区163 bp,3′端非编码区456 bp,开放阅读框987 bp,编码328个氨基酸。通过序列比对发现,南方鲇Stra8与哺乳类和鸟类的相似性很低(与人相比仅为32.0%,与鸡相比仅为27.4%),表明了Stra8的保守性较差,这暗示了它们在功能上可能有一定的差异。组织分布研究发现,Stra8特异地表达于性腺,暗示了Stra8可能参与减数分裂的启动；并且在成体雌雄性腺表达没有明显性差,这与哺乳类成体仅在雄性精巢表达不同。原核表达得到重组蛋白His-Stra8分子量约为43KD,N-端带有His-tag标签,并纯化了His-Stra8重组蛋白,免疫小鼠后,制备了抗体。由于南方鲇Stra8表达量较低,我们通过原位杂交的方法没有检测其mRNA信号。因此,制备抗体的目的就是为研究Stra8表达的细胞类型提供方法。通过genomic walking方法,从南方鲇基因组克隆了Stra8的启动子,约1.4kb,并将其亚克隆到荧光素酶报告基因pGL3载体中,同时将Sf1、Foxl2、2种Dmrt1选择性剪接体(Dmrt1a和Dmrt1b)、Wt1等转录因子以及3种雌激素受体亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1中。在CHO细胞中,南方鲇Dmrt1a增强了Stra8的转录活性；而Dmrt1b抑制了Stra8的转录活性；并且Dmrt1a和Dmrt1b对Stra8的调控作用具有剂量依赖性。然而已检测的其他转录因子对Stra8转录活性具有微弱的抑制作用,这暗示了Stra8除受这些因子的调控外,一些未知因子可能影响sc-Stra8的表达。综上所述,本研究从3种硬骨鱼类的EST序列中分离了仅在高等脊椎动物报道的Stra8同源基因,并从南方鲇将其克隆。这是首次从低等脊椎动物分离到Stra8。组织分布研究发现,Stra8仅在雌雄性腺表达,暗示了其可能参与减数分裂的启动；启动子分析发现,在检测的多种转录因子中,Stra8主要受到Dmrt1的调控,这与在哺乳类的研究类似。