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第一部分载奥沙利铂/吲哚菁绿相变型纳米粒的理化特性和双模态成像目的:制备载奥沙利铂/吲哚菁绿相变型纳米粒并检测其理化性质和在体外的双模态成像能力方法:1.采用改良的双乳化法制成载奥沙利铂(OXP)/吲哚菁绿(ICG)的相变型纳米粒(OI_NPs);透射电镜和扫描电镜观察其外观和形态;马尔文粒径仪测量其粒径、多分散系数和电位;紫外分光光度计检测ICG光学特性、稳定性和其包封率和载药量;高效液相色谱仪测量OXP包封率和载药量。2.带孔的琼脂糖凝胶模块用于体外光声成像和超声成像检测。实验分为四组:(1)PBS组;(2)空球组(Blank NPs);(3)游离ICG组(free ICG);(4)OI_NPs组。用百胜超声仪和Vero LAZR光声成像仪分别采集1.5W/cm~2 808nm激光辐照2分钟前后的超声成像图和光声成像图。最后应用图像处理软件对采集的图片进行定量分析。结果:1.OI_NPs表面光滑呈球形,粒径为264.50±11.53nm,对称性良好;多分散系数为0.14±0.05;zeta电位为-15.50±2.78mV。ICG包封率为55.90±2.45%和载药量为2.03±0.09%。OXP包封率为26.02±0.72%,载药量为1.42±0.04%。包埋在OI_NPs中的ICG与游离ICG相比,吸收光谱和荧光光谱未发生明显的波长偏移,具有更好的光学稳定性。2.体外双模态成像结果显示:OI_NPs在808nm激光辐照后,其超声成像的B超模式和造影增强模式及光声成像比照射前增强,且与其余各组相比显著增强。结论:用改良的双乳化法成功制备了载OXP和ICG的相变型纳米粒,具有良好的双模态成像能力,有助于更好的实现对卵巢癌的诊疗一体化。第二部分载奥沙利铂/吲哚菁绿相变型纳米粒联合光声动力对卵巢癌细胞杀伤作用研究目的:研究载奥沙利铂/吲哚菁绿相变型纳米粒联合光声动力对卵巢癌细胞的杀伤作用方法:采用对数生长期的ID8细胞,分为下列7组:对照组(Control),光声组(PSDT),载ICG的相变型纳米粒(I_NPs),载ICG的相变型纳米粒联合光声组(I_NPs+PSDT),游离OXP组(free OXP),载OXP和ICG的相变型纳米粒组(OI_NPs)和载OXP和ICG的相变型纳米粒联合光声组(OI_NPs+PSDT),根据分组给予不同处理。24小时后用MTT法检测各组的细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡情况。结果:不同处理因素作用24小时后MTT结果显示:free OXP组,OI_NPs组,I_NPs+PSDT组,OI_NPs+PSDT组的细胞存活率分别为80.94±1.04%,75.72±5.44%,59.36±5.77%,33.31±5.27%。OI_NPs+PSDT组的细胞存活率显著低于其他组(P<0.001)。细胞凋亡结果趋势基本与MTT一致。OI_NPs+PSDT的细胞凋亡率为67.01±4.60%,显著高于其他组(P<0.001)。结论:光声介导下的OI_NPs将OXP的化疗作用和光/声化学反应结合起来,增强了化疗和光声动力的抗肿瘤效果,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。第三部分载奥沙利铂/吲哚菁绿相变型纳米粒协同光声动力的免疫作用研究目的:探讨载奥沙利铂/吲哚菁绿相变型纳米粒协同光声动力的免疫作用方法:将对数生长期的ID8细胞分为以下7组,对照组(Control),光声组(PSDT),载ICG的相变型纳米粒(I_NPs),载ICG的相变型纳米粒联合光声组(I_NPs+PSDT),游离OXP组(free OXP),载OXP和ICG的相变型纳米粒组(OI_NPs)和载OXP和ICG的相变型纳米粒联合光声组(OI_NPs+PSDT),根据分组给予不同处理,治疗后4h,通过流式细胞术检测CRT在细胞膜上的易位。治疗后24h,通过蛋白质免疫印记(western blot)测量HMGB1的释放,化学发光法检测ATP分泌。用活性氧清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)清除活性氧后用流式细胞仪检测钙网蛋白的易位。肿瘤疫苗接种实验分为下列6组在体外预处理ID8细胞:对照组(Control),光声组(PSDT),载ICG的相变型纳米粒联合光声组(I_NPs+PSDT),游离OXP组(free OXP),载OXP和ICG的相变型纳米粒组(OI_NPs)和载OXP和ICG的相变型纳米粒联合光声组(OI_NPs+PSDT).然后将经过处理的3x10~6个ID8细胞注射到6-8周龄雌性C57BL/6小鼠的左侧肩下。7天后,在对侧右侧肩下注射200μl无菌PBS重悬的1x10~6个活ID8细胞。监测右侧肩下肿瘤发展,观察60天,记录无瘤率。乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测疫苗接种的免疫活性小鼠脾淋巴细胞的杀伤能力。结果:游离OXP组,OI_NPs组,I_NPs+PSDT组和OI_NPs+PSDT组的CRT表达,ATP分泌和HMGB1释放都有不同程度的增加,而OI_NPs+PSDT组增加明显高于其他组。用活性氧清除剂清除上述四组产生的ROS后,各组CRT表达量有不同程度的下降,尤其是I_NPs+PSDT组,从43.44±0.50%降低到2.56±0.57%。接种OI_NPs+PSDT疫苗的小鼠,60天观察后,无肿瘤小鼠的百分比为72.73%,对肿瘤再次攻击的成功保护高于其他组(P<0.05)。乳酸脱氢酶(LDH)释放实验表明,随着效靶比的增高,分别接种游离OXP,OI_NPs,I_NPs+PSDT和OI_NPs+PSDT疫苗的免疫活性小鼠脾淋巴细胞杀伤活性增强。接种OI_NPs+PSDT疫苗的杀伤率增高的趋势更加明显。当效靶比为100:1时,OI_NPs+PSDT组的杀伤率为43.58±4.61%,明显高于其他组(P<0.01)。结论:通过近红外光和低强度超声激发OI_NPs增强了抗肿瘤药物OXP和光声动力诱导肿瘤免疫原性死亡的能力,使DAMPs释放或暴露增多。其免疫原性增强的作用可能跟活性氧的产生有关。小鼠预防接种能产生长期抗肿瘤疫苗接种作用,与能引起宿主抗肿瘤免疫反应有关。