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研究背景及目的:炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）的发病机制尚未被完全阐明,目前认为与异常的肠道免疫有关,以过度的黏膜炎症反应为特征。在重要的免疫介质中,异常的CD4+T细胞反应即效应T细胞（effector T cell,Teff）及调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）之间的失衡,认为是肠道受损的主要原因。雌激素受体（estrogen receptor,ER）β是肠道主要的ER亚型,高表达于正常肠组织。我们前期研究表明肠道ERβ具有抗炎作用。但是,ERβ在IBD中的作用及潜在抗炎机制并未被完全阐明。尤其,ERβ是否表达于CD4+T细胞并调节异常的CD4+T细胞反应及调控肠道黏膜免疫。本研究旨在明确IBD患者外周血ERβ+CD4+T细胞变化,评估其临床意义;建立葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）诱导的慢性结肠炎小鼠模型,给予结肠炎小鼠特异性ERβ激动剂ERB041干预,观察其治疗作用,探讨ERβ对肠道Teff/Treg的影响及可能的抗炎机制。研究方法:1、收集溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）患者30例,克罗恩病（Crohn’s disease,CD）患者31例,健康志愿者（health control,HC）29例的临床资料及外周血、肠道活检组织。流式细胞技术检测外周血ERβ+CD4+T细胞、Treg比例。免疫荧光及RT-PCR的方法检测IBD患者肠道ERβ蛋白、基因表达。分别将ERβ+CD4+T细胞比例与疾病活动指标、Treg比例行相关性分析。2、给予雄性C57BL/6小鼠2%DSS饮水建立慢性结肠炎小鼠模型,正常对照组给予自由食水,ERB041治疗组:DSS饮水同时每天给予ERB041皮下注射。记录每只小鼠体重、大便性状、检测结肠长度,H&E染色评估肠道病理学改变,评估ERB041对抗结肠炎的治疗作用。3、RT-PCR方法检测小鼠结肠ERβ以及炎症因子:IL 1β、IFNγ、IL 17A、IL18、TNFα;抑炎因子:IL10、TGF-β1基因表达。4、提取小鼠脾脏单个核淋巴细胞、肠系膜淋巴结单个核细胞、肠上皮间淋巴细胞、肠固有层淋巴细胞,流式细胞技术检测ERβ+CD4+T细胞、CD4+T细胞（CD3+CD4+）、CD8+T细胞（CD3+CD8+）、Teff（CD4+CD25-）、Treg（CD4+CD25+FOXP3+）、CD39+Treg、TIGIT+Treg的比例变化。5、体外实验:磁珠分选正常未处理小鼠肠系膜淋巴结na?ve CD4+T细胞,给予TGF-β1、ERB041、PHTPP（ERβ特异性拮抗剂）干预诱导其向Treg分化。流式细胞技术检测各组细胞中Treg分化程度及smad2/3磷酸化水平。6、体外实验:磁珠分选正常未处理小鼠脾脏Treg、CD4+CD25-、CD8+T细胞。以CFSE标记CD4+CD25-和CD8+T细胞分别与Treg混合培养,给予ERB041或者PHTPP干预后流式细胞技术检测Treg对T细胞的增殖抑制作用。结果:1、活动期UC和CD患者外周血ERβ+CD4+T细胞比例较健康志愿者下降（P<0.05）,并与疾病活动指标呈显著负相关（UC相关系数r=-0.6350,CD相关系数r=-0.4986）。IBD患者肠道ERβ蛋白、基因表达量较健康志愿者下降。2、ERβ特异性激动剂干预可显著缓解DSS诱导的小鼠慢性结肠炎,逆转体重下降,恢复结肠长度、降低疾病活动指数、减少肠道炎症因子释放及增加抑炎因子表达（P<0.05）。3、DSS诱导的慢性结肠炎小鼠脾脏、结肠上皮间淋巴细胞、结肠固有层ERβ+CD4+T细胞比例较正常对照组明显下降,结肠炎小鼠肠道ERβ基因表达明显降低（P<0.05）;ERB041干预可逆转以上改变。4、DSS诱导的慢性结肠炎小鼠:结肠黏膜固有层CD4+、CD8+T、Teff细胞比例较正常对照组明显增高;脾脏、肠系膜淋巴结、结肠上皮间淋巴细胞、结肠固有层Treg频数较正常对照组明显降低,固有层CD39+Treg、TIGIT+Treg频数明显降低（P<0.05）。ERβ特异性激动剂干预可减少结肠炎小鼠固有层CD4+、CD8+T、Teff细胞浸润、恢复Treg及TIGIT+Treg数量（P<0.05）。5、DSS慢性结肠炎小鼠及IBD患者ERβ+CD4+T细胞与Treg比例呈正相关性（小鼠相关系数r=0.7684,UC相关系数r=0.4684,CD相关系数r=0.5452）。6、ERβ特异性激动剂干预na?ve CD4+T细胞可诱导其向Treg分化,增强TGF-β1介导的促Treg分化效应;增强CD4+T细胞中smad2/3磷酸化水平（P<0.05）。7、ERB041干预可增强Treg对T细胞的增殖抑制作用（P<0.05）。结论:1、活动期IBD患者外周血ERβ+CD4+T细胞数量下降,与疾病活动度相关。该细胞可作为评判IBD疾病活动的生物指标之一。2、ERβ特异性激动剂对DSS慢性结肠炎小鼠具有抗炎的保护性效应,可恢复结肠黏膜固有层受损的ERβ+CD4+T细胞,抑制肠道促炎因子释放、促进抑炎因子表达、减少固有层致病性T细胞聚集、增强Treg反应。ERβ的抗炎作用可能与恢复肠道Teff/Treg平衡有关。3、ERβ的抗炎机制可能是通过启动ERβ相关信号与TGF-β1/Smad下游信号通路之间的交叉反应诱导FOXP3表达,促进Treg分化,这将增加肠道Treg数量并增强Treg对T细胞增殖的免疫抑制活性,从而参与调控肠道黏膜免疫。