【摘 要】
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该论文尝试通过非培养和培养的方法从盐碱湖土壤样品中获得极端酶资源.一方面我们通过获取环境样品中的总DNA建立了环境DNA文库,从文库中筛选酶基因或者基因片段;另一方面分
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该论文尝试通过非培养和培养的方法从盐碱湖土壤样品中获得极端酶资源.一方面我们通过获取环境样品中的总DNA建立了环境DNA文库,从文库中筛选酶基因或者基因片段;另一方面分离培养环境样品中的微生物,从分离纯化的菌株中筛选产酶菌株进而纯化酶.在建立土壤样品的DNA文库时,我们首先对盐碱湖土壤进行透析,除去土壤中盐分,用液氮冻融方法使细胞裂解,利用CTAB和PVPP结合的方法除去土壤中的腐殖质成分,最后得到了高纯度的DNA样品,经16SrRNA PCR检测样品中含有古菌及细菌.将所获得的DNA样品经超声波打断后连接到pUC18质粒,转化E.coli DH 10B,建立插入片段为3-6kb的环境基因文库.对文库的部分克隆进行了测序,通过数据库的相关数据比对,对序列功能进行分析,发现部分克隆为酶基因片段,包括一个碱性木聚糖酶部分序列.对同一环境样品纯化得到的菌株进行了淀粉酶、纤维素酶、琼脂糖酶、木聚糖酶、海藻酸盐裂解酶、透明质酸裂解酶、黄原胶裂解酶、香豆胶裂解酶、瓜儿胶裂解酶菌株的筛选,得到部分产酶菌株.对其中一株Bacillus sp.ZBAW6的木聚糖酶进行了分离纯化和性质测定.该酶分子量约为45kDa左右;在pH5.5~10.5范围内均具有较高酶活性和稳定性;最适反应温度为70℃,65℃保温120分钟,酶活力基本不变.该酶作用于Beech-xylan的K<,m>为0.11mg/ml,V<,max>为23.89umol/min·mg.金属离子中Hg<2+>对该酶有强抑制作用.通过PCR的方法得到部分酶基因,经测序N末端序列为DPFAAAVAPL.
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