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肝细胞癌是当今全球最常见的恶性肿瘤之一,因早期诊断困难,病情进展快而死亡率高。糖链的异常改变与肿瘤的发生发展密切相关,N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-IVa(GnT-IVa)是糖基转移酶家族的重要成员,其作用是在N-糖链的五糖核心上特异性形成P-1,4分支糖链。课题组前期研究发现GnT-IVa在肝癌组织中高表达,为此,探究GnT-IVa在肝细胞癌发生发展过程中的调控机制,一方面可以揭示糖链变化的细胞生物学功能,另一方面还可为肿瘤细胞标志物的筛选和新药靶点的开发奠定基础。本论文采用qRT-RCR、Western Blot、侵袭小室、划痕实验、MTT、凝集素印记等技术,在低表达GnT-IVa的细胞中过表达GnT-IVa后探究其对细胞基本生物学特征的影响。 首先本课题采用GnT-IVa低表达的SMMC-7721和Changliver为体外细胞模型,将GnT-IVa质粒瞬转到这两种细胞后,采用MMT、划痕实验、qRT-PCR等实验方法研究发现:GnT-IVa过表达后细胞增殖迁移能力增强,同时E-cadherin表达下调、Snail表达上调。 本研究利用稳转GnT-IVa的SMMC-7721和Changliver细胞株做了深入研究。利用凝集素印记分析了GnT-IVa过表达后细胞糖链的变化,结果显示细胞P-1,4糖链发生了明显的改变。同时研究发现糖链变化可能引起了细胞形态改变。因此本研究利用qRT-PCR和Western Blot初步分析了GnT-IVa与上皮间质转化(EMT)的关系,结果表明GnT-IVa过表达后N-cadherin、Snail表达上调,提示GnT-IVa促使细胞EMT。进而本课题利用侵袭小室实验、划痕实验、黏附实验对细胞运动能力进行了探究,研究表明GnT-IVa在SMMC-7721和Changliver中过表达后细胞侵袭迁移能力增强、黏附能力下降。在此基础上,本课题采用MTT、克隆形成实验对细胞增殖进行了分析,结果表明GnT-IVa过表达后SMMC-7721和Changliver细胞增殖能力变强,且细胞可能通过上调c-Myc和cydinDl来促进增殖。在以上研究基础上,本课题对相关信号通路进行了初步探究,结果发现GnT-IVa在SMMC-7721和Changliver细胞中过表达后Integrinpi表达上调,FAK表达上升,磷酸化的ERK的表达增加。 综上所述,本论文初步确认了GnT-IVa过表达通过改变细胞糖链影响细胞形态,有促进细胞EMT的趋势,进而促进细胞侵袭、迁移、增殖,抑制细胞黏附。在此过程中GnT-IVa通过Integrin pl/FAK/ERK信号通路对上述过程发挥了调控作用。因此,GnT-IVa在肝癌发生发展过程中发挥着非常重要的作用。本研究为清楚阐明GnT-IVa在肝癌中的作用机制奠定了基础,为筛选肝癌生物标志物丰富了理论基础。