由香蕉线条病毒(BSV)引起的香蕉线条病是香蕉生产上的主要病毒病之一。香蕉线条病的症状主要是在发病初期叶片产生连续或不连续的褪绿条斑，随着病情发展，条斑逐渐变褐坏死，假茎、叶柄和果穗有时也会出现条纹症状。病情严重时，会出现植株矮化、不开花或开花结果果穗小、果实不饱满等现象。香蕉线条病是由Lassoudière于1974年首次在非洲发现，1986年由Lockhart鉴定出其病原为BSV，并对该病毒的传播、寄主范围、症状表现及基因组特征等方面进行了较为系统的研究。目前，BSV在世界各香蕉产区广泛发生，包括中国的台湾、广东、云南等香蕉产区。本研究制备了香蕉线条病毒广东分离物(BSV—GD) ORF3功能结构域编码的蛋白MP、CP、AP、RT、RH的高效价多克隆抗血清，为进一步研究它们的功能提供了基础；利用酵母双杂交系统对BSV—GD编码的各蛋白之间的相互作用进行了研究，获得了BSV—GD编码蛋白之间的相互作用关系图谱，并利用酵母双杂交系统初步确定了BSV—GD PⅡ与CP互作各自的具体功能位点，而且对BSV—GD ORF1、ORF2编码的蛋白PⅠ、PⅡ和ORF3功能结构域基因编码的MP、CP进行了亚细胞定位研究，初步获得了它们在洋葱和烟草表皮细胞中的定位，从多方面为进一步阐明BSV编码各蛋白的生物学功能提供了依据。内容及结果如下： ⑴克隆了BSV—GD ORF3功能结构域MP、CP、AP、RT和RH基因，分别将其连接到原核表达载体pET—28b(+)上，构建了原核表达重组质粒pET28b—MP、pET28b—CP、pET28b—AP、pET28b—RT和pET28b—RH，转化大肠杆菌Rosseta(DE3)后，经IPTG诱导，分别表达了大小为30.8 kDa、42.5 kDa、13.7 kDa、23.9kDa和17.5kDa左右的His融合蛋白。可溶性分析表明融合蛋白均以包涵体形式存在。利用其N—端的His标签进行纯化、回收，分别获得了高纯度的目的融合蛋白，以其作为抗原免疫健康家兔分别获得了这5个蛋白的抗血清，western—blotting分析表明制备的抗血清专化性强，间接ELISA法检测抗血清效价，结果表明抗血清效价均达26万倍以上。 ⑵构建了BSV—GD ORF1、ORF2和ORF3的MP、CP、AP、RT和RH功能域基因的诱饵载体pGBKT7—X和靶标载体pGADT7—X，分别对其编码的目的蛋白进行蛋白毒性和自激活活性检测，对确定无蛋白毒性和自激活活性的载体通过酵母双杂交实验检测其编码蛋白两两之间及其自身之间的相互作用。研究发现诱饵载体均无自激活活性，由此推测PⅠ、PⅡ、MP、CP、AP、RT和RH均无转录激活活性；研究发现PⅠ、MP、AP的靶标载体具有自激活活性，由此推测PⅠ、MP、AP可能具有DNA结合活性；研究发现PⅡ与PⅠ、PⅡ与MP、PⅡ与CP、PⅡ与RH、MP与RT、AP与RH之间以及PⅡ自身之间能发生互作，初步获得了BSV—GD编码蛋白之间的相互作用关系图谱，并推测PⅡ与PⅠ、CP之间的互作对病毒的介体传播起重要作用。利用酵母双杂交系统对PⅡ和CP的一系列缺失突变体进行蛋白互作研究，初步确定了PⅡ与CP互作中各自的具体功能位点，结果表明CP与PⅡ的互作位点位于CP的C—端即BSV—GD ORF3编码的多聚蛋白PⅢ的875—905 aa处，PⅡ与CP的互作位点位于PⅡ的中部39—106 aa处。另外，本研究通过Far western—blotting方法证实了PⅡ与PⅠ、PⅡ与CP能发生体外物理性互作。 ⑶克隆了BSV—GD ORF1、ORF2及ORF3功能结构域基因MP、CP与eGFP的融合基因，并构建了融合基因及eGFP的植物表达载体，将表达载体通过基因枪轰击的方法转化洋葱表皮细胞，同时将表达载体转化农杆菌，通过农杆菌渗透接种的方法转化本生烟叶片，然后通过荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察GFP荧光分布情况判断PⅠ、PⅡ、MP、CP的亚细胞定位。结果初步表明PⅠ、PⅡ定位于洋葱表皮细胞和本生烟表皮细胞的细胞核和细胞质；CP定位于洋葱表皮细胞的细胞核和细胞质，主要定位于细胞核；MP定位于洋葱表皮细胞的细胞质，主要定位于细胞质中的细胞骨架，以及本生烟表皮细胞的细胞质和细胞壁。 ⑷构建BSV—GD ORF1、ORF2、ORF3和ORF3部分片段SP61389的植物表达载体并转化农杆菌，利用农杆菌共渗透法接种转GFP烟草来鉴定RNA沉默抑制子的系统对BSV—GD编码的蛋白进行了RNA沉默抑制子筛选，结果未发现BSV—GD编码RNA沉默抑制子。