玉米赤霉烯酮的微生物脱毒研究

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玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEN)是一种主要由镰刀菌属(Fusarium)菌株产生的霉菌毒素,广泛存在于谷物及谷物加工产品中。ZEN是一种雌激素类似物,具有多种毒性,可以使动物产生雌激素亢进症并导致不孕或流产,对畜牧业及动物和人类的健康造成较大的危害。本课题通过对ZEN脱毒菌株的筛选,得到了具有ZEN脱毒能力的四株细菌菌株,研究了其脱毒机理、脱毒的影响因素及对其他毒素的脱毒情况。通过筛选,从霉变玉米和玉米地耕作层中获得四株细菌菌株,具有较强且稳定的ZEN脱毒能力。经过16S rDNA鉴定并与Genbank数据库比对,确定四株菌都属于芽孢杆菌属(Bacillus),分别将其命名为Bacillus sp. LY5-20,Bacillus sp. LY5-28,Bacillus sp. LY6-5和Bacillus sp. LY6-15。在30℃条件下24小时内对2μg/ml的ZEN溶液去除率分别达到96.9%、95.0%、98.0%和95.8%。对四株菌株的脱毒方式研究表明,高温灭活后的各菌株脱毒效果显著下降,分别能去除溶液中31.2%、29.5%、38.5%、34.6%的ZEN;而菌体细胞裂解后的离心沉淀物(以细胞壁成份为主)也同样具有脱毒能力,分别能去除反应体系中37.6%、54.4%、47.1%、55.1%的ZEN。以上结果说明,这四株菌株的细胞壁有一定的ZEN吸附能力。另外,对各菌株发酵液的上清进行了ZEN脱毒能力检测,菌株LY5-20、LY5-28、LY6-5、LY6-15的发酵液上清分别可去除98.6%、100%、92.2%、85.3%的ZEN,说明在发酵液上清中含有降解酶,能够降解掉反应体系中的ZEN,且降解酶可以分泌到菌体细胞以外。研究了不同培养条件对LY5-20、LY5-28、LY6-5、LY6-15四株菌株的脱毒能力的影响。菌悬液浓度对各菌株的ZEN脱毒能力有显著的影响。四株菌株在20-42℃范围内对于温度都不敏感,脱毒能力相差不大。当温度升到50℃时LY5-20、LY6-5、LY6-15三株菌的脱毒能力下降到40%-54%之间,说明在50℃的条件下细菌分泌的降解酶受到抑制,活性下降;而对于LY5-28菌株来说,50℃并没有对其ZEN脱毒作用有什么大的影响,可能是其降解酶对温度不敏感。四株菌株在碱性条件下的ZEN脱毒能力好于酸性条件,LY5-20、LY5-28、LY6-5在pH9条件下脱毒效率最高,LY6-15在pH为7的条件下脱毒效率最高。EDTA是一种金属离子螯合物,能够结合位于酶活性位点的金属离子,从而抑制该种金属酶的活性。EDTA可导致四株菌的脱毒能力大幅度下降,说明脱毒过程中有金属酶参与。脱氧雪腐镰孢菌烯醇(Deoxynivalenol, DON)和赭曲霉毒素A(OchratoxinA,OTA)也是在谷物中常见的霉菌毒素,本研究也同时考查了四株菌株对这两种毒素的脱毒能力。将各菌株与DON或OTA共同培养后,反应体系中的毒素减少了12%--20%,且高温灭活的菌体与活菌的结果差别不大,说明本研究的四株菌株不产生可降解DON或OTA的酶,对于DON和OTA的脱毒作用主要来自于细胞壁的吸附作用。
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