论文部分内容阅读
玉米是我国重要的粮食作物和饲料作物,在我国的粮食作物中占有重要地位,其产业发展对我国农业经济具有重要的战略意义。但是玉米真菌病害严重威胁我国玉米的生产,每年造成的损失难以估量,因此选育优良的抗病玉米品种成为当务之急。常规抗病育种方法在玉米的品种改良、选育等方面发挥了重要作用,但存在选育年限长、耗资大、效率低及抗性种质资源匮乏等问题,近年来以导入目的基因创造新种质的基因工程手段的应用,为玉米抗真菌病育种的选育开辟了一条新途径。
本试验以玉米自交系昌7-2、郑58、黑糯为试材,建立并优化农杆菌介导玉米自交系的遗传转化体系,通过农杆菌介导法将抗真菌病基因β-1,3-葡聚糖酶(BG2)基因导入玉米自交系中,并探讨了影响其遗传转化效率的主要因素,确定了玉米芽尖转化法的最佳转化条件,优化了玉米幼胚转化法,为培育玉米抗真菌病新品种奠定了基础。研究的主要内容和结果如下:
1、转基因植株的获得与其对应的筛选体系的选择有关,本试验所用的筛选抗生素为卡那霉素。经过2次梯度试验,试验结果表明,在卡那霉素浓度为900mg/L获得很好的筛选效果。但是由于在后期试验中,发现抗性植株也受到了较大的伤害,造成其很容易死亡。因此,本试验选择卡那霉素浓度为800mg/L作为筛选浓度,在此浓度下对转化植株进行筛选较为安全可靠。
2、以昌7-2、郑58、黑糯三个玉米自交系的芽尖为受体材料,详细研究了影响农杆菌介导玉米芽尖转化法的各种因素,建立了玉米芽尖遗传转化体系。研究结果表明:在侵染培养基加入乙酰丁香酮浓度为60mg/L或者在伤口处滴加2μl浓度为150μmol/L的乙酰丁香酮能显著提高转化效率;菌液浓度(O)D600值为0.7,侵染培养基的pH值为5.2,浸染时间为11-12min,共培养时间为3d,共培养温度为27℃时有利于抗性植株的产生。应用这个转化体系,获得了转基因植株。PCR检测表明,外源基因已经整合进玉米基因组中。这一体系的建立,为进一步将有用基因导入玉米优良自交系奠定了基础。
3、玉米胚性愈伤组织是目前遗传转化中应用比较多的受体材料。以昌7-2、郑58、黑糯三个玉米自交系的胚性愈伤组织为受体材料,优化了农杆菌介导胚性愈伤组织的条件。试验结果表明,基因型对胚性愈伤组织的产生有很大影响,郑58>昌7-2>黑糯;在侵染培养基和共培养基中加入乙酰丁香酮的浓度为5mg/L,共培养温度为26℃,共培养时间为60h时,获得的抗性愈伤组织数量最多,有利于提高转化效率。