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目的1.用原位种植方法，建立可稳定遗传GFP（green fluorescent protein绿色荧光蛋白）的Lewis肺癌（LLC Lewis lung carcinoma）C57BL/6小鼠模型。2．无血清条件培养基单克隆法培养获得Lewis肺癌细胞中的悬浮球细胞，并初步鉴定其生物学特性。方法1．建立原位种植小鼠模型：用matrigel胶分别包裹103、104、105个表达GFP的LLC亲代细胞原位种植于6-8周雌性C57BL/6小鼠，在第7天、14天、21天、28天每组分别解剖3只，使用Sellstrom Z87荧光护目镜和LDP470nm的蓝光手电筒直接快速地观察成瘤与转移，统计成瘤率与成瘤时间。2．单克隆法并用无血清条件培养基获得LLC亲代细胞中的悬浮球细胞。3．克隆球形成实验对比LLC成球细胞与LLC亲代细胞的体外增殖能力。4．侵袭实验比较两种细胞的侵袭能力。5．电镜对比两种细胞的形态差异。6．成瘤实验比较两种细胞的致瘤力。结果1．三组小鼠成瘤均稳定表达GFP，成瘤率分别为25.00%、58.33%、91.67%，与剂量呈正相关（P<0.01）；成瘤时间分别为（23.33±4.04）d、（21±5.72）d、（18.45±7.84）d，与剂量无明显关系（（P>0.05），所有小鼠术后均苏醒并存活。2．单克隆法、无血清条件培养基成功培养出LLC成球细胞，且可稳定传代，光镜下观察可见悬浮生长的中空细胞球，结构紧密。3．克隆球形成实验结果显示LLC成球细胞的克隆形成率为（75.5±5.6）%，LLC亲代细胞的克隆形成率为(26.4±3.1)%，两者有显著性统计学差异(P<0.01)，LLC成球细胞的体外增殖能力明显大于LLC亲代细胞。4．侵袭实验：侵袭实验结果显示LLC成球细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数为259±26，LLC亲代细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数为36±5，LLC成球细胞与LLC亲代细胞相比相对侵袭指数为6.43±2.75，LLC成球细胞穿膜数高于LLC亲代细胞(t=6.812，P <0.01)，LLC成球细胞较LLC亲代细胞具有更强的侵袭能力。5．电镜结果显示LLC成球细胞形态核浆比例明显增大，细胞器稀少。6．成瘤实验结果显示：LLC成球细胞在只种植100个细胞的情况下仍可成瘤，成瘤能力明显强于LLC亲代细胞。结论1．成功建立稳定表达GFP的lewis肺癌小鼠模型，可用于治疗肺癌药物的快速筛选。2.无血清单克隆法成功培养出LLC悬浮球细胞，其增殖侵袭与致瘤能力明显强于LLC亲代细胞，具有肿瘤干细胞特性。