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背景:肝细胞癌(HCC)是一种常见的恶性肿瘤和全球范围内癌症的主要死亡原因之一。最近的流行病学数据表明,不仅在亚洲和非洲,而且在北美和欧洲,肝癌的发病率都呈现持续上升的趋势,而且在未来十年还将如此。HBV感染是肝癌的重要致病因素。尽管安全有效的HBV疫苗得到广泛应用,但慢性乙肝病毒(HBV)感染仍然是HCC最主要的致病因素,超过一半的HCC患者是HBV慢性携带者。亚洲和北美的研究显示,HBsAg携带者相对于非HBV感染人群,肝癌发生风险增加了25-37倍。肝癌预后一般不佳,而且确诊时往往都为晚期,给手术及局部治疗带来相当困难,而且肝癌对化疗具有相当的抵抗。HBV编码的X蛋白在HBV的致癌机制中扮演着重要的角色,在前期的相关研究中已被进一步证实,然而HBx对肝细胞癌变后的进一步发展是否有促进作用,以及相关的机制还不十分清楚,因此对HCC发生发展的分子机制的深入研究,有望寻找到更多的关键性分子,为临床靶向治疗提供理论依据。目的:观察乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞中丝裂原活化蛋白激酶激酶3(MKK3)及其下游分子p38丝裂酶原活化蛋白激酶(p38MAPK)的表达的影响,探讨相关的信号转导机制,及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:分别将质粒pCDNA3.1及pCDNA3.1-HBx重组质粒经脂质体介导转染入人肝癌细胞株HepG2,经G418筛选培养,并用反转录PCR和Western blot鉴定,获得表达X蛋白的稳定细胞株HepG2-HBx和阴性对照细胞株HepG2-pCDNA3.1,同时以HepG2细胞株作空白对照。通过RT-PCR和Western blot检测上述三种细胞株中MKK3、p38MAPK在mRNA水平和蛋白水平的表达变化,并用细胞免疫荧光检查磷酸化p38MAPK蛋白在细胞浆及细胞核中的变化;通过MTT实验检测三种细胞株的增殖情况。采用SPSS12软件进行统计学分析。结果:MKK3在mRNA和总蛋白水平的表达在HepG2-HBx中均高于其他两组,其他两组无明显差异;p38MAPK在mRNA和总蛋白水平无明显差异,而其蛋白磷酸化水平和其在核蛋白中的表达在HepG2-HBx中较其他两组升高;细胞免疫荧光实验可见,HepG2-HBx细胞中,磷酸化的p38MAPK含量较其他两种细胞丰富,细胞核中的p38MAPK也明显多于其他两组细胞。在MTT实验显示,HepG2-HBx细胞较其他两组细胞有更强的增殖能力,尤其在转染72小时后更为明显。结论:HBx可以通过上调肝癌细胞中MKK3的表达,促进p38MAPK磷酸化和入核,从而进一步激活下游分子发挥生物活性。p38MAPK通路在HBx促进肝癌细胞的增殖中发挥重要作用。HBx的这一作用可能是导致HBV相关性肝癌与非HBV相关性肝癌临床特点及肿瘤生物学差异的机制之一。