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益生菌FGM为非解乳链球菌,是从鸡的盲肠中分离的一株健康菌株。前期研究证明,黄芪经益生菌FGM发酵后,多糖的得率有显著提升,发酵提取的多糖对SD大鼠的肝纤维化有预防和治疗作用,具有增强肉仔鸡的免疫力、抗病力和免疫器官指数,也能促进肉仔鸡的健康状况和生产性能。为了阐述发酵黄芪多糖(fermented Astragalus polysaccharides,FAPS)的免疫调节机理,本论文采用温浸法提取经益生菌FGM发酵后的黄芪多糖,并对提取的发酵黄芪多糖进行了纯化,应用ELISA、RT-PCR和western blot等技术分析了发酵黄芪多糖对小鼠树突状细胞成熟过程的影响,取得了如下研究结果:(1)采用Box-Benhnken响应面法,优化了黄芪经发酵后的多糖提取工艺。提取时间65 min、提取温度80℃、料液比1:9时得到的FAPS含量最高,为6.72 mg/mL;提取时间、提取温度和料液比对发酵黄芪多糖的含量影响显著,并且每两个因素间存在一定的交互作用。(2)采用水提醇沉法分别提取了发酵黄芪多糖(FAPS)和黄芪多糖(APS);采用苯酚硫酸法检测了两种多糖的得率和纯度;采用鲎试剂(LAL)法对提取多糖的内毒素的含量进行了检测。结果表明:FAPS和APS的内毒素含量均小于0.1EU/mL。发酵黄芪多糖的得率高于黄芪多糖的得率,分别为3.31%和1.91%。FAPS和APS的纯度分别为91.3%和88.5%。(3)采用ELISA、RT-PCR和显微观察技术分析结果表明,不同浓度的FAPS和APS作用于小鼠骨髓源树突状细胞(DCs)后,细胞的体积变大,其表面突起和阳性对照组(LPS)相似,突起变长且比较明显,长短不一;ELISA结果表明,DC分泌IL-12、TNF-α、IL-1β、IL-6的量有显著增加,这些细胞因子的mRNA的表达量也显著增加,FAPS组的效果明显高于APS组;FAPS作用于DCs后,还能促进T细胞增值。(4)采用RT-PCR和western blot技术分析了FAPS诱导树突状细胞成熟的相关信号通路。结果表明:FAPS通过TLR2或TLR4信号通路诱导树突状细胞成熟;FAPS能极显著增加磷酸化蛋白JNK、P38和NF-κBp65的表达量,提示:在FAPS促进小鼠骨髓源DCs的成熟过程中,可能激活了MAPK和NF-κB信号通路。综上所述,提取时间、提取温度和料液比对发酵黄芪多糖的提取率有显著影响,各因素间存在一定的交互作用;利用本研究优化的FAPS提取工艺和纯化方法,可获得纯度较高的发酵黄芪多糖,得率和纯度均高于同等条件下提取的黄芪多糖;发酵黄芪多糖通过JNK MAPK信号通路、P38 MAPK信号通路和NF-κB信号通路促进小鼠骨髓源DC的成熟。