随着肺癌分子生物学研究的进展，已经发现了多种相关的癌基因和抑癌基因，这些基因的异常改变促使支气管上皮细胞转化为恶性肿瘤细胞。到目前为止已发现与肺癌相关的抑癌基因有Rb、p53、p16、nm23、APH、MCC、APC等。抑癌基因失活是肺癌发生和发展过程中非常重要的事件。肿瘤细胞中抑癌基因失活常常表现为一个等位基因丢失(allelic loss)和另一个存留等位基因(retained allele)失活性突变或其启动子高甲基化。其中，等位基因丢失是由肿瘤细胞中多见的染色体缺失所致，它同时还会伴有抑癌基因座位相邻区域的杂合性丢失(loss of heterozygosity，LOH)。研究表明，在恶性胶质瘤、非小细胞肺癌、黑色素瘤和急性白血病中均有9p21染色体的LOH。1994年Kamb等首次证实p16是一种新的抑癌基因，一旦p16基因发生改变，将导致细胞无控制的生长。 p16基因是细胞周期素依赖激酶抑制蛋白的一种，细胞周期素-细胞周期素依赖性蛋白激酶-细胞周期素依赖激酶抑制蛋白调控系统在细胞周期调控中起重要作用，p16通过与细胞周期素依赖性蛋白激酶4特异的结合来抑制该蛋白激酶的活性，阻止细胞从G1期到S期，从而抑制细胞增殖；当p16基因缺失或突变而导致功能失活时，细胞周期素依赖性蛋白激酶4与细胞周期素依赖激酶抑制蛋白D结合而被激活，Rb蛋白磷酸化，释放出一些转录因子使G1期细胞进入S期，细胞进入增殖期。 p16基因定位于9p21，全长8.5kb，由3个外显子和2个内含子组成，外显子1为126pb，外显子2为307bp，外显子3为11bp，编码一个由156个氨基酸组成的分子量为16kD的蛋白质。Kamb等通过对大量肿瘤细胞系p16基因的检测发现，约50％的肿瘤细胞系有p16基因的缺失，其中胶质瘤最高为71％，其次分别是骨肉瘤60％、黑色素瘤58％、肾癌56％、膀胱癌33％、白血病25％、卵巢癌29％。他们用RT-PCR方法检测p16基因的mRNA时发现，有p16DNA缺失的肿瘤细胞系p16mRNA表达均为阴性，故认为p16基因的纯和性缺失使得DNA不能转录成RNA，因而导致P16基因的失活。Vonlanthen等报道在28例肺癌中，有16例发生了p16基因mRNA的缺失，因此也认为基因的缺失是p16基因在人类多数肿瘤中失活的主要机制。Cao等对31例非小细胞肺癌p16基因的mRNA表达进行研究发现，7例非小细胞肺癌组织中发生p16基因mRNA的缺失，缺失率为22．6％，该结果提示p16基因的改变在非小细胞肺癌的发生发展中起着重要的作用。w’ashimi等人也有类似的报道，并且发现pl6基因的缺失多数发生在非小细胞肺癌细胞中，因此认为… 基因可能参与了肺癌的发生和发展过程，并与肺癌的组织学类型密切相关，p16基因mRNA表达的缺失，导致其不能翻译成有功能的蛋白产物，从而引起细胞的恶性转化。在人肺癌、食管癌、结肠癌后腺癌、神经胶质瘤、白血病等均发现了pl6基因的改变而导致其蛋白表达降低。Jin等人应用免疫组化方法对106例早期非小细胞肺癌的研究发现，54％的病例存在… 蛋白的表达，P16蛋白表达阳性的病例术后生存时间较长，比P16蛋白阴性者预后好。Huang等的研究也发现171例非小细胞肺癌中62例根6．3％）有pl6蛋白的缺失，pl6蛋白的异常表达与鳞状细胞癌密目相关，在腺癌中… 蛋白异常者较为少见，并且与腺癌的预后无关。在鳞状细胞癌中，P16蛋白的丢失往往提示预后不良。 在肺癌的研究中还观察到在某些病例p16基因外显子1中不C富含区域100％存在DNA过甲基化，P16基因5端CPG岛的甲基化可使P16基因转录静止，因此启动子区的异常甲基化可能是p16基因失活的主要机制。Okamoto在25例原发性非小细胞肺癌中发现无一例有… 基因的缺失。因此推测P16基因的5端存在CPG岛的多处甲基化，从而阻断了P16的转录，甲基化所致的P16基因的失活在非小细胞肺癌的发生过程中可能发挥着重要的作用。Belinsky等对肺癌的研究也证实了这一点，并且研究还发现在支气管上皮细胞重度增生和鳞状化生等癌前病变阶段就能检测出P16基因的异常甲基化，因此作者认为p16基因甲基化是肺癌发生的早期事件。William等收集了ZI例病人的痰液标本用于甲基化的检测，pl6的检测阳性率为100％，其中10例病人在痰液收集时已经确诊，而另外11例的痰液均是在临床确诊肺癌前5－35个月收集的。痰液检查与原发肺癌组织检查的一致性分别为90％和78％。痰液检查阳性的病人在2－6年后发生肺癌’的机率明显增高。肿瘤DNA的高甲基化主要发生在正常情况下非甲基化的启动子区 CPG岛上，与抑癌基因的转录失活有关。两条等位基因同时发生突变或同时缺失可以导致肿瘤的发生，抑癌基因的一条等位基因突变伴随另一条等位基因的杂和性缺失，同样也可以引起肿瘤。基因启动子区的异常甲基化的作用方式与抑癌基因的”二次打击”学说极其相似。多数肿 ·2· 瘤的异常甲基化通常都发生在一条等位基因发生突变后的第二个等位基因 上，或者第一条等位基因发生异常甲基化而第二条等位基因则发生杂和性 缺失，遵循Knudson的二次打击学说，这些改变都将会使整个基因的表达缺