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该研究在GenBanK中查出牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和口蹄商病毒(FMDV)基因组序列,对两种病毒基因区域进行同源性比较,结合两种病毒基因组结构特点以及相关资料,确定BVDV的非结构蛋白p125基因区、FMDV编码衣壳蛋白的VP1区为引物设计区.根据多重PCR引物的设计原则,以GOLDKEY计算机软件对上述选定的基因区进行引物设计,并以VNTI30进行引物分析比较,结果设计出两结引物P1(AGTGAGGAGGAAGTCTACGG)、P2(AGGATCCACCCAAGATGTTC)、P3(ACCCAACAGCTTACCACAA)、P4(CAGTATGTCTCGGCTCTCT).实验证明该引物可扩增BVDV NCP型和无插入序列的CP型400bp和有插入序列的CP型600bp的片断,FMDV250bp片断.经PCR反应条件的优化,可以在同一个反应中,同时扩增出两种病毒不同大小的两个特异片断.建立的多重反转录PCR扩增其他病毒未见阳性结果.另外,该多重反转录PCR可检测10<-3>稀释的模板.通过初步应用证明该研究建立的BVDV、FMDV多重反转录PCR检测方法具有的应用前景.