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在探寻细菌应激反应系统作为抗菌素增强剂作用靶目标的过程中,我们发现大肠杆菌ycjW基因的突变株对药物萘啶酸的致死效应超敏感。这种对药物超敏感的缺陷性状可以通过P1噬菌体转导到其它大肠杆菌中,表明该突变确实导致了细菌的超敏感性状。在萘啶酸作用下,ycjW突变株的死亡更加迅速和彻底,而喹诺酮类药物的结构并不影响ycjW突变株的超敏感性。此外,萘啶酸对ycjW突变株及野生型菌株的致死效应都需要羟自由基的积累。但是在没有YcjW蛋白存在的情况下,萘啶酸可以通过一条不依赖于羟自由基的途径杀灭细菌。
为了研究YcjW的调控网络,我们通过ChIP实验发现了三个可能受到YcjW蛋白调控的目标片段(yqhG、menE—menC和yhaM-yhaO),并通过EMSA实验证实了在体外YcjW蛋白能够与这三个目标片断结合。
通过DNApull—down实验找到了一些能够与ycjW基因上游区域结合的蛋白。其中,GlpR很有可能参与了ycjW基因表达的调控。当用萘啶酸处理后,在pull—down实验中得到GlpR的含量降低,暗示着在抗菌素存在下,转录抑制子GlpR的表达量减少。因此,GlpR在细菌的应急反应中可能起负调控作用。
以上数据表明细菌应激反应系统有可能成为提高抗菌素效应的作用靶目标。此工作为我们寻找新的药物作用靶目标奠定了初步基础。