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乳腺癌是当前世界上女性患者中最为常见的一种癌症,因其易发生转移而导致患者复发率和死亡率高。目前临床上治疗乳腺癌仍然大都采用传统的治疗方法,如手术、化疗和放疗,但这种治疗方法往往伴随着副反应,严重影响着患者的生活质量。因此寻求毒副作用小,抗癌效果好的新型药物已成为当前研究的重点。石蒜碱是从石蒜科植物中分离提取得到的一种异喹啉类生物碱,此类生物碱具有多种药理学活性和抗肿瘤作用。这类天然小分子化合物因其分子结构简单,能直接作用于细胞,毒副性较小,而越来越受到研究者们的关注。因此本研究试图探讨石蒜碱对乳腺癌细胞生长转移的影响及其可能的作用机制。本研究主要内容如下:1.石蒜碱抑制乳腺癌细胞的生长增殖。利用MTT实验比较了石蒜碱及其衍生物二氢石蒜碱对乳腺癌细胞活性的影响,发现石蒜碱更能抑制乳腺癌细胞的活性。2.石蒜碱影响乳腺癌MDA-MB-231细胞内蛋白质的表达变化情况。通过TMT定量蛋白质组学技术发现MDA-MB-231细胞经石蒜碱处理后出现了差异蛋白质,对这些差异蛋白质进行分析后发现石蒜碱能影响MDA-MB-231细胞内的Wnt信号通路。3.石蒜碱抑制乳腺癌细胞的生长、诱导细胞凋亡以及调控细胞周期。在细胞水平上,结晶紫染色实验和克隆形成能力实验结果说明石蒜碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7具有一定的毒性作用,能抑制乳腺癌细胞的生长和增殖:线粒体膜电位检测实验结果说明石蒜碱能使乳腺癌细胞的线粒体膜电位发生变化;Hoechst 33342染色实验结果表明乳腺癌细胞经石蒜碱处理后,视野中凋亡小体的数目随着石蒜碱浓度的增加而增多;流式细胞术和Western blotting实验结果说明石蒜碱能诱导MDA-MB-231和MCF-7细胞发生凋亡,且药物处理浓度越高,细胞凋亡越明显;PI单染法实验结果说明石蒜碱能影响乳腺癌细胞内的周期分布,使细胞周期阻滞在G2/M期。4.石蒜碱抑制乳腺癌细胞的迁移。细胞划痕实验结果说明石蒜碱能抑制乳腺癌细胞的迁移能力,且抑制程度与药物处理浓度和时间有关。Western blotting实验结果表明乳腺癌细胞经石蒜碱处理后Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin表达减少,GSK-3β蛋白表达增加,而与EMT过程有关的上皮样标志蛋白E-cadherin表达上调,而间充质标志蛋白N-cadherin则表达下调,同时细胞骨架蛋白F-actin表达下调。5.通过将带有荧光素酶基因的4T1细胞接种到BALB/c小鼠构建荷瘤小鼠模型进行体内实验,结果显示石蒜碱能抑制体内乳腺肿瘤的生长和转移。结合以上实验结果可知,石蒜碱能在体内和体外抑制乳腺癌细胞的生长和转移,使细胞周期阻滞在G2/M期,诱导乳腺癌细胞发生凋亡。石蒜碱通过调控Wnt经典信号通路中关键蛋白质的表达来抑制乳腺癌细胞EMT转化过程。本项目为石蒜碱抗肿瘤活性作用机制的研究提供了一定的实验基础,为临床上治疗乳腺癌提供了一个新的研究方向。