目的环指蛋白212(Ring finger protein 212,RNF212)编码作为泛素连接酶的无名指蛋白。基因直系同源物的预测表明,哺乳动物RNF212基因与秀丽隐杆线虫Zhp3基因具有相当大的序列同源性。在克隆的鼠全长RNF212基因中,该307个氨基酸的蛋白具有一个N端无名指结构域,然后是一个卷曲螺旋结构域和一个富含C端丝氨酸的结构域。无名指结构域的特征在于E3-泛素连接酶的存在,从而催化蛋白质修饰。人的RNF212蛋白与全长小鼠蛋白具有显著的同一性,并具有相似的域结构。RNF212基因位于人类4p16.3号染色体上,并在人体的许多组织和器官中广泛表达。它在胃、十二指肠、结肠、食管、肝脏、胆囊和阑尾中均有不同程度的表达。RNF212基因在细胞信号传导、细胞组装、DNA复制、重组和修复中起着重要作用。RNF212与多种人类肿瘤有关,其中RNF212与黑色素瘤的进展不佳有关,因为该基因在原发性黑色素瘤引起的衰竭过程中过表达。另外,RNF212基因在存在点突变或插入缺失突变的情况下与男性乳腺癌有关,而其在女性乳腺癌中则发生了丢失或缺失突变。但是RNF212基因在胃癌中的致癌作用的研究报道却较少。本研究旨在进一步探讨RNF212在胃癌及临近非肿瘤组织中的表达变化情况,对RNF212表达异常时患者临床病理特征之间的关系进行分析,同时对HGC-27,、MGC-803,、BGC-823,、AGS、SGC-7901、SNU-1、SNU-16等7种胃癌细胞系和人正常胃粘膜细胞(GES-1)中RNF212在蛋白质水平和m RNA水平的表达差异进行研究,并通过RNF212干扰质粒进一步探究RNF212对胃癌细胞增殖、迁移等生物学功能产生的影响。方法收集2004年1月至2007年9月在天津医科大学附属肿瘤医院施行根治性外科手术的111例胃癌患者的新鲜肿瘤组织和邻近的非肿瘤组织蜡块和与之对应的完整临床数据资料。采用免疫组织化学方法验证RNF212在癌和癌旁组织中的表达水平。使用半定量RT-PCR(Semi-quantitative reverse transcription and polymerase chain react,Sq RT-PCR)和Western Blot分别检测7种胃癌细胞系和一种正常胃黏膜细胞系中RNF212的m RNA和蛋白表达水平。选取胃癌细胞系MGC-803并转染RNF212干扰质粒,通过CCK8(Cell Counting Kit-8)和克隆形成实验研究癌基因RNF212对胃癌细胞增殖的影响,通过Transwell实验探究RNF212基因对胃癌细胞侵袭能力产生的影响。结果1、免疫组织化学结果显示,RNF212在胃癌组织中的阳性表达率为66.67%(74/111),阴性表达率为33.33%(37/111),前者明显高于后者,且差异具有统计学意义(P=0.008)。在研究RNF212表达水平与胃癌患者临床病理特征和预后的关系时发现患者手术时年龄和p N分期与RNF212的高表达具有相关性(P=0.021;P=0.002)。2、通过CCK8和克隆形成实验对RNF212干扰组细胞和对照组细胞进行对比研究时发现,干扰组细胞克隆团的形成数目明显减少,Transwell实验中干扰组细胞的迁移和侵袭能力较对照组明显减弱。结论1、RNF212基因的异常表达与胃癌病变的发生发展有关,对早期筛查胃癌可能具有重要的指导意义。2、RNF212在胃癌组织中的表达明显高于临近非肿瘤组织,RNF212的高表达与阳性淋巴管浸润和手术年龄显著相关。RNF212的高表达与低生存率相关,并且在多变量分析中被确定为胃癌患者的独立预后因素。RNF212的高表达是胃癌患者的独立预后因素,其在胃癌组织中的表达水平可用于评估患者的风险并指导其治疗。3、RNF212对细胞的增殖和迁移能力具有促进作用,从而促进胃癌的进展。