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由立枯丝核菌引起的黑痣病是马铃薯生产中一种主要的土传病害,长年连作会不断加剧病害的发生和为害,而当前主要依靠以嘧菌酯为主的化学药剂沟施对黑痣病进行防治。化学防治虽然杀死了土壤中病原菌,但是也杀死了很多土壤中的中性微生物甚至有益微生物,破坏了土壤中微生物群落结构。而生防菌的施用不仅能抑制病菌群体数量而且能改善土壤中菌群结构,有利于调节土壤微生态平衡。本研究以前期筛选到对黑痣病菌具有拮抗作用的菌株Z17-2为材料,系统对其种类、抑菌谱、生防因子、发酵条件和菌剂制备等方面进行了研究,主要结果如下:
1.本研究通过形态学、革兰氏染色、孔雀绿染色、16S rDNA(Gen-bank MK271286)和yrB DNA序列(Gen-bank MK295695)分析、结合生理生化分析将菌株Z17-2鉴定为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。解淀粉芽胞杆菌Z17-2对马铃薯黑痣病菌、早疫病菌、枯萎病菌、干腐病菌、疮痂病菌有抑菌作用,其中对病原真菌黑痣病菌、早疫病菌、枯萎病菌、干腐病菌的抑菌圈直径在25.0mm以上,对放线菌疮痂病菌的抑菌圈直径为43.0mm,对病原细菌黑胫病菌无抑制作用。
2.对菌株Z17-2进行了5种环脂肽合成基因(sfp、ituA、fenB、bacD、mycB)的检测,结果表明B.amyloliquefaciens菌株Z17-2种含,sfp、fenB、bacD、mycB4种脂肽合成基因,并且菌株Z17-2具有分泌蛋白酶、纤维素酶、铁载体等物质的能力,其发酵液对温度、酸碱、蛋白酶的耐受能力较强。
3.通过优化培养基组成成分和正交试验,以及优化培养条件,获得了解淀粉芽胞杆菌Z17-2的最佳培养基为麦芽糖20g/L,豆饼粉10g/L,NaCl1g/L,CaCl21g/L,MgSO4·7H2O1g/L,最适培养条件是接种量2%,装液量50mL/250mL,初始pH6.0,温度35℃,摇床转速220r/min,优化后菌体生长量OD600比优化前提高了120%,抑菌活性提高了43.8%。
4.通过筛选生防菌剂的组成成分及其添加量,获得了解淀粉芽胞杆菌Z17-2可湿性粉剂的配方为:发酵液70%,高岭土10%,三聚磷酸钠10%,CaCO32%,抗坏血酸0.1%,测定菌剂的质量指标为有效活菌数4.3亿CFU/g,润湿时间53s,悬浮率82.77%,细度≥99%,水分含量2.4%。
1.本研究通过形态学、革兰氏染色、孔雀绿染色、16S rDNA(Gen-bank MK271286)和yrB DNA序列(Gen-bank MK295695)分析、结合生理生化分析将菌株Z17-2鉴定为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。解淀粉芽胞杆菌Z17-2对马铃薯黑痣病菌、早疫病菌、枯萎病菌、干腐病菌、疮痂病菌有抑菌作用,其中对病原真菌黑痣病菌、早疫病菌、枯萎病菌、干腐病菌的抑菌圈直径在25.0mm以上,对放线菌疮痂病菌的抑菌圈直径为43.0mm,对病原细菌黑胫病菌无抑制作用。
2.对菌株Z17-2进行了5种环脂肽合成基因(sfp、ituA、fenB、bacD、mycB)的检测,结果表明B.amyloliquefaciens菌株Z17-2种含,sfp、fenB、bacD、mycB4种脂肽合成基因,并且菌株Z17-2具有分泌蛋白酶、纤维素酶、铁载体等物质的能力,其发酵液对温度、酸碱、蛋白酶的耐受能力较强。
3.通过优化培养基组成成分和正交试验,以及优化培养条件,获得了解淀粉芽胞杆菌Z17-2的最佳培养基为麦芽糖20g/L,豆饼粉10g/L,NaCl1g/L,CaCl21g/L,MgSO4·7H2O1g/L,最适培养条件是接种量2%,装液量50mL/250mL,初始pH6.0,温度35℃,摇床转速220r/min,优化后菌体生长量OD600比优化前提高了120%,抑菌活性提高了43.8%。
4.通过筛选生防菌剂的组成成分及其添加量,获得了解淀粉芽胞杆菌Z17-2可湿性粉剂的配方为:发酵液70%,高岭土10%,三聚磷酸钠10%,CaCO32%,抗坏血酸0.1%,测定菌剂的质量指标为有效活菌数4.3亿CFU/g,润湿时间53s,悬浮率82.77%,细度≥99%,水分含量2.4%。