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烟田土壤生态系统是烟草的品质和产量的重要影响因素,然而土壤微生物多样性对其调控起着至关重要的作用。本实验采样传统平板培养法与现代高通量测序技术从可培养微生物及分子生态两方面探究不同施肥处理对烟田土壤细菌多样性的影响。研究结果如下:1.通过平板培养法分离纯化出29株土壤细菌。统计分析不同有机肥处理土样可培养细菌的多样性指数,施加牛粪和秸秆可以增加烟田土壤中可培养细菌的数量及细菌种群丰富度,其中牛粪处理效果最为显著;而施加有机肥A和有机肥B两种复合有机肥较常规化肥对烟田土壤可培养细菌的数量及种类的影响不明显。2.应用Solexa基因组分析平台,针对6种不同烟田施肥处理土壤,在7月、8月、9月三个时间,采集的18个烟田土壤样品进行测定分析,共获得1727576条原始序列,220697个OTU,所有样品OTU的覆盖率均大于0.89,结合稀释曲线,Shannon-Wiener曲线可得,本次测序数据可以客观真实反映所提取土样中细菌的种群结构及差异性特征。3.由18个土壤样品序列的Simpson指数和Shannon指数分析得:对烟田土壤施用有机肥可不同程度的影响烟田土壤样品的Simpson指数和Shannon指数。不同有机肥的处理可以不同程度的影响土壤细菌的数量及物种丰富度。牛粪和发酵豆饼处理对烟田土壤细菌的群落丰富度影响最为显著,有机肥A和有机肥B施用较常规化肥处理均呈现出良好的土壤细菌丰富度改变效应,而秸秆有机肥对烟田土壤细菌群落丰富度影响较小。4.采用RDP classifier对序列进行分类地位的鉴定,这些序列属于酸杆菌纲(Acidobacteria)、放线菌纲(Actinobacteria)、拟杆菌纲(Bacteroidetes)、硝化螺旋菌纲(Nitrospira)、变形菌纲(Proteobacteria)等27个菌纲。其中酸杆菌纲(Acidobacteria)和放线菌纲(Actinobacteria)所占比例最大,分别为25.6%和22.7%。比例最高的前10个科分别为:鞘脂单胞菌科(Sphingomonadaceae)、链霉菌科(Streptomycetaceae)、生丝微菌科(Hyphomicrobiaceae)、芽孢杆菌科(Bacillaceae)、链球菌科(Streptococcaceae)、红色杆菌科(Rubrobacteraceae)、硝化螺菌科(Nitrospiraceae)、类诺卡氏菌科(Nocardioidaceae)、Koribacteraceae、Solibacteraceae。5.不同有机肥处理对土壤细菌菌群结构影响显著。对烟田土壤施加牛粪和发酵豆饼可显著提高硝化螺菌属(Nitrospira)和链霉菌属(Streptomyces)在土壤细菌中所占比例;施加有机肥A处理可以使烟田土壤中假丝酵母菌属(Candidatus)、红游动菌属(Rhodoplanes)和链霉菌属(Streptomyces)的比例显著增加,而降低硝化螺菌属(Nitrospira)和红色杆菌属(Rubrobacter)的比例;有机肥B和秸秆对优势菌属的比例影响较常规化肥处理差异不显著。6.通过PCA、PCoA和LDA差异贡献分析得,6种不同施肥处理土样中细菌种群结构相似度为73.45%,但不同处理间仍然存在显著性差异。由COG构成差异分析得,本次实验样本间细菌种群的差异主要表现在信号转导和碳素循环及代谢方面。