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中枢神经系统(central nervous system, CNS)损伤后普遍伴随着神经炎症反应。小胶质细胞被认为是CNS内一类重要的神经免疫细胞,在CNS损伤引起的炎症反应中发挥了重要作用。正常情况下,CNS中的小胶质细胞处于相对静息的状态——胞体较小,突起细且长满分枝。当CNS损伤后,小胶质细胞会被激活。活化的小胶质细胞突起回缩,胞体变肥大,呈现出阿米巴样的形态,并能分泌许多炎症介质——包括细胞因子、趋化因子、氮氧自由基等。适度活化的小胶质细胞能够有效清除病源体和死亡细胞的碎片,但过度活化的小胶质细胞则能引起神经元的继发性损伤,参与各种神经病理过程。研究表明,抑制小胶质细胞活化能够从一定程度上抑制神经炎症反应,并减轻CNS损伤后的病理症状。因此,如果能够找到有效调控小胶质细胞活化的药物,将有利于CNS损伤后的修复。Nitidine(NTD)是从芸香科花椒属植物两面针中提取的一类苯并菲啶类生物碱,是该植物内的主要有效成分之一。虽然NTD作为一种消炎止痛的纯天然中药已有数千年的使用历史,但是其在中枢神经系统中的研究尚未见报道。本研究利用LPS诱导体外培养的小胶质细胞活化模型,通过形态学、real-timePCR、免疫蛋白印迹等手段分析了NTD对小胶质细胞活化的调控作用及其作用机制;并利用免疫组织化学的方法观察了NTD在小鼠大脑针刺伤模型中的作用。本研究的主要结果如下:1、大鼠原代小胶质细胞的纯化培养。Iba1染色结果显示,体外纯化培养的小胶质细胞纯度能够达到95%以上。2、NTD能够抑制小胶质细胞的活化。LPS刺激小胶质细胞时可诱导其细胞活化,表现为形态的改变、促炎细胞因子的释放、迁移能力的增强等。NTD能够抑制LPS引起的小胶质细胞活化。3、NTD在实验浓度下不具有明显的细胞毒性。MTT和LDH实验结果显示,在小于1μM浓度时,NTD对N9和原代小胶质细胞都没有表现出毒性作用。4、ERK信号通路可能参与NTD调节小胶质细胞活化过程。对MAPKs信号通路的分析表明,NTD能够抑制LPS诱导小胶质细胞活化时ERK的磷酸化,但不影响p38和JNK的磷酸化水平。5、NTD能够抑制小鼠大脑针刺损伤引起的小胶质细胞活化,并减少神经元的凋亡。小鼠大脑针刺伤造模后,按照2.5mg/kg/day进行腹腔注射NTD,连续给药3天,结果发现,与生理盐水组相比,给药组损伤区域周围活化小胶质细胞的数量显著减少,并且神经元凋亡比例也显著下降。