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背景与目的:多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome,PCOS）是导致育龄女性不孕的最常见生殖内分泌疾病。PCOS患者窦状卵泡多,却无优势卵泡发育,大量卵泡发生闭锁,是导致不孕的病理生理基础。近年,辅助生殖技术（Assisted Reproductive Technology,ART）发展迅速,已成为PCOS患者解决不孕问题的主要手段,但临床上仍有部分PCOS患者经ART治疗后,未获得满意的临床结局。究其原因很可能是由于PCOS患者卵泡发育异常,使得临床获取的卵母细胞质量差,进而导致后期胚胎发育潜能低下。然而,目前临床上针对PCOS卵泡发育异常尚缺乏有效的治疗对策,主要原因是对其发生机制仍不完全清楚。既往研究已证实,卵巢颗粒细胞（granulosa cells,GCs）对卵泡的发育成熟起重要作用,其增殖凋亡水平对卵泡的正常发育有着至关重要的作用。近年研究报道称,在PCOS异常的卵泡中发现有GCs增殖水平减弱,提示GCs增殖能力的调节障碍与PCOS卵泡发育异常可能有关。因此,探究PCOS患者卵巢颗粒细胞增殖功能异常的分子机制可为寻找新的诊疗对策提供线索。PATL2蛋白是一种m RNA绑定蛋白（m RNA-binding protein,m RNP）,其结构中的PAT区域可结合靶m RNA,调控其转录后翻译。PATL2表达减少或缺失明显抑制人卵母细胞发育与成熟,并通过调控纺锤体的形成,影响卵母细胞减数分裂和成熟,导致卵泡发育异常。令人惊讶的是,笔者前期研究发现PATL2表达减弱与PCOS异常卵泡中颗粒细胞数量减少亦存在密切关系,且颗粒细胞增殖水平受肾上腺髓质素2（Adrenomedullin2,ADM2）调控。我们推测:PATL2蛋白的PAT结构可与ADM2的m RNA结合,保护该m RNA免于被降解,促进ADM2翻译表达,进而利于颗粒细胞增殖。本研究将深入研究PCOS异常卵泡中调控颗粒细胞增殖能力的作用机制,其结果有助于理解PCOS患者卵泡发育异常的分子机制,为改善临床上行ART治疗PCOS患者的卵泡质量,提高其卵母细胞发育潜能,开辟新的诊疗思路和方法,具有重要的理论意义和潜在市场应用前景。方法:1.根据鹿特丹标准收集2020年01月至2020年12月在南昌大学附属妇幼保健院生殖中心接受ART治疗的PCOS组51例患者,并选择同期在我院辅助生殖中心接受ART治疗的52例非PCOS且月经规则的育龄期不孕症患者作为对照组,收集并分析两组患者的临床相关资料的特征。2.收集两组患者卵泡液并体外分离获取颗粒细胞,利用EDU分别检测两组患者的颗粒细胞增殖情况;采用免疫荧光和Western Blot及RT-PCR方法检测两组患者颗粒细胞PATL2和ADM2的蛋白及m RNA表达情况。3.构建PATL2-si RNA并将其导入KGN细胞中,敲降PATL2基因。采用Western Blot和RT-PCR方法分别检测对照组和敲降组KGN细胞中PATL2和ADM2的蛋白和m RNA表达水平,同时CCK8检测KGN细胞的增殖水平。4.构建PATL2的“PAT”结构区域突变质粒,并导入KGN细胞中,分为野生型组（WT,Wild type）及突变型组（MT,Mutant type）进行观察比较。采用Western Blot和RT-PCR方法分别检测两组KGN细胞中PATL2和ADM2的蛋白和m RNA表达水平,同时CCK8检测KGN细胞的增殖水平。5.建立PCOS大鼠模型,Ki-67免疫组化检测卵巢组织颗粒细胞增殖情况,免疫组化检测卵巢组织中PATL2和ADM2的蛋白表达情况。Western Blot检测卵巢组织中PATL2和ADM2的蛋白表达情况;RT-PCR检测卵巢组织中PATL2和ADM2的基因表达情况。结果:（1）根据纳入、排除标准及不孕标准,共103例患者纳入本研究,其中PCOS组51例,对照组52例;两组患者的临床资料显示:PCOS组和对照组患者的年龄、FSH、E2、PRL无显著差异（P＞0.05）,PCOS组的体重、LH、T明显高于对照组（P＜0.05）。两组患者在接受Gn治疗后,PCOS组患者的卵母细胞成熟率和受精率均明显低于对照组,且存在显著差异（P＜0.05）,但两组患者的卵裂率、优胚率无显著差异（P＞0.05）。（2）EDU检测两组颗粒细胞增殖结果显示:PCOS组颗粒细胞的增殖水平明显低于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。免疫荧光结果显示,PATL2蛋白主要表达于卵泡颗粒细胞的胞浆中,与对照组相比,PCOS组颗粒细胞中的PATL2表达显著减弱;Western Blot和RT-PCR结果显示:与对照组相比,PCOS组颗粒细胞的PATL2和ADM2表达水平显著下调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。（3）利用si RNA敲降KGN细胞的PATL2表达后,ADM2表达显著减少;同时,CCK8检测PATL2敲降组的KGN细胞增殖能力亦明显减弱。（4）CCK8检测结果显示:与拥有正常“PAT”区域的WT组相比,缺失“PAT”区域的MT组的细胞增殖能力明显减弱;Western Blot和RT-PCR结果显示:尽管两组KGN细胞的PATL2表达水平无改变,但MT组细胞的AMD2表达水平明显降低。（5）动物实验结果发现:Ki-67免疫组化检测卵巢组织颗粒细胞模型组增殖水平低于对照组,免疫组化、Western Blot和RT-PCR结果表明模型组的PATL2和ADM2的表达水平显著下降。结论:（1）PCOS患者卵泡发育异常,且其颗粒细胞增殖水平明显减弱,提示颗粒细胞增殖能力减弱与PCOS卵泡发育异常密切相关。（2）体外细胞实验证实:PATL2可通过调控ADM2的表达而促进颗粒细胞增殖,提示PATL2的减弱可能通过下调ADM2的表达抑制颗粒细胞增殖能力,而这一机制很可能是导致PCOS卵泡异常发育的重要原因之一。（3）体内动物实验进一步验证体外细胞实验结果:PCOS异常卵泡中颗粒细胞的PATL2和ADM2表达水平明显减低,且颗粒细胞增殖能力显著减弱。