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目的 继发性肝损伤在暴发性肝衰发病机制中起着重要作用。继发损伤发生在原发损伤之后。原发性损伤使体内堆积了大量毒物,包括大分子、中分子、小分子。至于上述物质在继发损伤中的机制十分复杂,但其最终结果将导致肝细胞的破坏。本实验研究合并Ⅱ期肝性脑病的重型肝炎患者血清中物质在体外对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率及白蛋白(ALB)mRNA表达的影响。 方法 10例重型肝炎合并Ⅱ期以上肝性脑病患者为实验组;10例慢性乙肝病人为对照组,空腹采血10ml,分离血清无菌超滤后,加入已培养成熟的Bel-7402细胞板中,经MTT染色后测出OD值,根据OD值计算出细胞生长抑制率。检测细胞培养上清液中ALT、LDH释放率从而推断出细胞膜的受损情况。然后在25%的血清浓度下,培养Bel-7402细胞24h后提取细胞内总mRNA,反转录成cDNA,用PCR方法扩增,得到ALB mRNA的特异电泳带,通过凝胶成像系统,测得电泳带光密度和面积,计算出ALB mRNA的相对量。 结果 1、通过MTT实验得出,实验组血清对Bel-7402细胞的生长抑制率随血清浓度升高而增加,当血清浓度高达50%时培养48小时后细胞生长抑制率为73%,与对照组比较有显著差异。 2、25%血清浓度作用下,不同时间段检测细胞培养上清液中ALT、LDH释放率,实验组与对照组无显著性差异。 3、25%血清浓度作用24小时后,用RT-PCR法测得实验组血清培养后细胞内ALB mRNA表达明显减少。讨论 重型肝炎患者由于肝衰时体内堆积了大量的大分子、中分子、小分子物质,至于这些物质损伤肝细胞的机制尚无定论。我们的实验结果提示:在体外Bel一7402细胞的生长抑制率随实验组的血清浓度升高而升高,但未发现肝细胞内的酶(ALT、LDH)大量外漏/溢出。在重型肝炎患者血清作用下,Bel一7402细胞内ALB mRNA的表达随作用时间延长而减少,可能与细胞大量死亡有关。实验组血清中物质抑制细胞增长,但对细胞膜无破坏作用,可能存在凋亡等机制,有待进一步探讨。结论 合并n期以上肝性脑病的重型肝炎患者血清对肝细胞的生长有抑制作用,同时使肝细胞内ALB mRNA的表达明显下降,但在肝细胞生长过程中对细胞膜无直接破坏作用。