【研究背景和目的】动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)作为一种慢性进展性的炎性疾病,是冠状动脉病变的主要病理基础。泡沫细胞的形成在动脉粥样硬化的发病机理中起着关键作用,而清道夫B3受体(CD36)介导的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)摄取是导致泡沫细胞形成的重要因素。我们前期研究发现,泛素特异性蛋白酶14(USP14)能够正向调控心肌肥大和脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应,但其对动脉粥样硬化的调控机制尚未明确。本研究旨在探讨USP14通过介导CD36受体的表达来调控脂质摄取和泡沫细胞形成,以期寻找动脉粥样硬化新的发病机制。【研究方法】1.利用质谱技术和分子结构模拟技术进行USP14与CD36相关性研究。2.采用不同处理抑制巨噬细胞中USP14的作用(IU1抑制USP14的活性、siRNA干扰USP14的表达),研究USP14对脂质转运相关受体(CD36、SR-A、Lox-1、ABCA1、ABCG1、SR-B1)的调控作用。3.在ox-LDL诱导的泡沫细胞模型上,采用不同处理抑制USP14的作用(IU1抑制USP14的活性、siRNA干扰USP14的表达),探讨USP14对oxLDL诱导的CD36的调控作用。4.采用免疫共沉淀技术,研究USP14与CD36的相互作用。5.采用激光共聚焦技术以及流式细胞术,研究在USP14被抑制或不被抑制的情况下,巨噬细胞摄取荧光标记的Dil-oxLDL能力。6.利用油红O染色技术,研究在USP14被抑制或不被抑制的情况下,巨噬细胞被ox-LDL诱导成泡沫细胞的程度。7.利用抗体依赖性阻断的方法,封闭CD36受体后,在USP14被抑制或不被抑制的情况下,进一步研究USP14对ox-LDL摄取的机制。【研究结果】1.USP14与CD36可相互结合。2.USP14通过抑制CD36的降解来调控其表达。3.抑制USP14可逆转ox-LDL诱导的CD36表达上调。4.USP14与CD36存在相互作用且USP14能够稳定CD36的表达。5.抑制USP14可降低巨噬细胞对Dil-oxLDL的摄取。6.抑制USP14可减少泡沫细胞的形成。7.USP14调控的巨噬细胞对ox-LDL的摄取及泡沫细胞的形成均依赖于CD36。【结论】抑制去泛素化酶USP14可促进CD36的降解从而减少泡沫细胞的形成。