耐高温酵母菌的多样性和酒精发酵特性的研究

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本研究的主要目的是从自然界中分离筛选出大量的耐高温酵母菌株,并对其进行分类学鉴定,分析耐高温酵母菌物种多样性,探讨其种属的地域分布情况。并对所筛选到的耐高温酵母进行生理生化性质及酒精发酵能力试验,从中筛选出产酒精能力强耐高温酵母菌株。采用稀释平板涂布法对采自国内5个省的29份新鲜的土壤样品进行耐高温酵母菌的分离筛选,共得到64株能在42℃下生长良好的耐高温酵母菌株。依据26S rDNA D1/D2区域序列分析,并结合形态学特征对这些菌株进行了分类学研究。分离的这64株酵母菌共分布于6个属7个种,分别为热带假丝酵母(Candidatropicalis)(占总分离株的39.1%)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)(29.7%)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)(23.4%)、酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)(3.1%)、季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)(1.6%)、Kazachsta-nia bovina(1.6%)和Candida palmioleophila(1.6%),优势菌株为热带假丝酵母,东方伊萨酵母和马克斯克鲁维酵母所占比例也较大。热带假丝酵母的地域分布最广。研究结果表明耐高温酵母菌在物种方面存在一定的多样性。采用固体平板培养法对所筛选到的64株酵母菌进行耐高温能力的测试,结果表明耐高温能力最好的是马克斯克鲁维酵母,所有马克斯克鲁维酵母菌株均能在50℃下生长,不同属的酵母菌和同种不同菌株的酵母菌在耐高温能力方面存在明显差异。采用添加不同浓度乙醇的YPD液体培养基对不同种属的酵母菌进行耐乙醇能力的测定,测定结果显示35℃下东方伊萨酵母耐乙醇能力最强,42℃和45℃下马克斯克鲁维酵母的耐乙醇能力强于其它种属的酵母菌株。采用葡萄糖发酵培养基对不同种属的酵母菌在高温下进行酒精发酵能力的测试。结果表明不同属的酵母菌和同种不同菌株的酵母菌在酒精发酵能力方面存在明显差异,其中马克斯克鲁维酵母酒精发酵能力最好,40℃发酵72h乙醇浓度最高的菌株可达6.5%(v/v)。马克斯克鲁维酵母菌在耐高温和产酒精能力方面有明显优势。采用葡萄糖发酵培养基对15株马克斯克鲁维酵母菌进行酒精发酵能力的测试。通过初筛和复筛最终得到了两株在高温下产酒精能力强的菌株,编号为KMBM2-5和KMBM1-2。KMBM2-5在42℃和45℃下发酵72h乙醇浓度分别为5.13%(v/v)、4.96%(v/v),KMBM1-2在42℃和45℃下发酵72h乙醇浓度分别为5.34%(v/v)、4.62%(v/v)。这两株酵母菌具有潜在的开发应用前景。
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