【摘 要】
：
檀香精油是目前世界上最昂贵的香料之一,其主要成分为檀香醇。檀香烯是檀香醇的前体化合物。为实现檀香烯的高效生产,本文通过对檀香烯合酶的表达调控以及内源萜类代谢途径的改造,利用酿酒酵母构建高效生物合成α-檀香烯的细胞工厂。本文首先考察了酿酒酵母中CPRISPR/Cas9基因编辑技术的编辑效率。结果表明,利用上下游为200-500 bp的同源臂,可以对2000bp-7000 bp的目标位点进行敲除,编辑
论文部分内容阅读
檀香精油是目前世界上最昂贵的香料之一,其主要成分为檀香醇。檀香烯是檀香醇的前体化合物。为实现檀香烯的高效生产,本文通过对檀香烯合酶的表达调控以及内源萜类代谢途径的改造,利用酿酒酵母构建高效生物合成α-檀香烯的细胞工厂。本文首先考察了酿酒酵母中CPRISPR/Cas9基因编辑技术的编辑效率。结果表明,利用上下游为200-500 bp的同源臂,可以对2000bp-7000 bp的目标位点进行敲除,编辑效率为100%;利用引物引入40 bp的同源区,能够高效实现1000-10000 bp的片段的插入。以酿酒酵母CENPK2-1C和BY4741为出发菌株,将tHMG1和ERG20表达组件分别整合至DPP1、LPP1位点来提高MVA途径的代谢强度。通过引入外源的檀香烯合酶在酵母工程菌中构建檀香烯的生物合成途径,并考察了启动子强度,宿主细胞以及表达质粒拷贝数对于α-檀香烯产量的影响。结果表明,以酿酒酵母SCN02为宿主细胞,以高拷贝质粒为表达载体,以启动子pTEF1来表达檀香烯合酶的α-檀香烯产量最高,达到12.7 mg/L。在此基础上对下游的角鲨烯途径进行了弱化,檀香烯产量进一步提高至24.7mg/L。最后,本文利用5个高效定位线粒体的信号肽,在原始菌株CEN.PK2-1C中构建靶向线粒体的檀香烯合成途径,檀香烯产量达25 mg/L,证明了将代谢途径进行亚细胞结构定位,可以有效提高目标产物的合成效率。本文结合代谢工程技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,在酿酒酵母体内成功构建了 α-檀香烯的生物合成途径,并通过对酵母线粒体的利用,实现檀香烯的高效生产。
其他文献
合同解除后,当事人得返还依据合同取得的财产。《中华人民共和国合同法》第97条对于相关问题做了概括性的规定。但是上列条文最大的特点就是以简易规定直接将“大事化了”,其用语十分笼统,缺乏可操作性,已然影响到法律适用的安定性。一般认为请求返还财产的法律依据在于《合同法》97条“恢复原状”的规定。问题在于,对于条文中“恢复原状”的内涵理解众说纷纭,莫衷一是。实际上更为本质的问题在于,实务中对于此种“恢复原
l发展现状与成效1.1饲料产量持续增长近年来，南充各饲料生产企业不断提升产能，强化营销，推动了当地工业饲料产量不断增长，近3年饲料产量年增幅均在10％以上。2013年，南充市工业饲料
这是一则日本的童话。 从前，有一位国王，性格冷酷。他国度里所有的地方都盖在厚厚的白雪之下，从来就没有花的芳香和草的翠绿他十分渴盼春天来到他的国家，但是春天从来都不肯光临。 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装
1选留好种公鸡1．1第一次选择在孵出后进行雌雄鉴别时，选择生殖器突起发达而结构典型的小公雏。
目的:建立盐酸特比萘芬乳膏HPLC分析方法,并使用该方法进行自制乳膏和原研制剂的透皮吸收考察和自制乳膏的含量测定。方法:采用Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-乙
结合当前的“互联网＋”应用，分析和探讨在医学大数据时代背景下，医学信息研究机构如何发挥自身优势，拓展医学信息研究的服务对象、目标和服务空间，组建医学信息行业特色新型智库的
随着经济与科技的发展,企业所处的环境也在不断变化,人力资本在企业中的重要性逐渐凸显。自2014年中国证监会发布《关于上市公司实施员工持股计划试点的指导意见》开始,员工持股计划在上市公司中的实施范围不断扩大,并不断成为国有企业激励员工的重要手段。员工持股计划能够有效解决企业由于所有权与经营权分离而带来的代理问题,并能优化企业内部员工结构及治理结构,起到一定长期的激励效果。但这项举措对企业的影响并不都
目的探讨终末期肾脏病患者血管钙化情况及其危险因素。方法收集尚未进入透析的慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)5期患者及CKD5D期[维持性血液透析(Maintenance hemodi
2010年被四川确定为畜禽养殖标准化生产推进年,为了深入推进标准化示范创建工程,示范带动广大养殖农户迅速进入现代健康养殖体系,从根本上保障畜产品质量安全、动物卫生安全
为了进一步理顺和规范国家与国营企业的分配关系,积极搞活企业,促进企业经营机制和行为的合理化,逐步提高财政收入占国民收入的比重,特制订“税利分流、税后还贷、税后承包”