研究背景:近年来，非淋菌性尿道炎(NGU)的发病率在西方国家已超过淋病，居性传播疾病的首位，我国的患病率亦迅猛增加，日益引起人们的重视。在NGU中，沙眼衣原体(Chlamydia trachomatics，Ct)感染是最常见的。泌尿道的Ct感染可导致多种疾病，引起严重的并发症、后遗症。因此，治疗Ct感染十分重要。Ct主要对大环内酯类、四环素类、喹诺酮类及利福平等抗生素敏感。而四环素类及喹诺酮类不能用于孕妇及婴幼儿，临床治疗Ct时多使用大环内酯类抗生素。随着大环内酯类抗生素在临床上广泛的应用，Ct耐药性的报道也陆续出现。细菌对大环内酯类药物的耐药机制主要是：①ermB基因引起的靶位改变。②主动外排。③50S核糖体突变：包括23S rRNAII区及V区以及L4、L22的突变。④钝化酶的产生。近年国外对氟喹诺酮和利福平耐药的Ct突变株已经在体外被成功诱导，并发现喹诺酮类是QRDR基因突变，而利福平则是rpoB基因突变。体外诱导肺炎衣原体对阿奇霉素耐药不成功，但诱导CtL2型却成功。目前国内对Ct耐药情况的报道较少，更没有关于诱导耐药问题的文献报道。本实验拟在体外测定红霉素、阿奇霉素、交沙霉素对Ct的敏感性，并用次抑菌浓度的三种大环内酯类药物诱导Ct耐药突变，探讨其诱导耐药机制。　　 目的:测定红霉素、阿奇霉素、交沙霉素对Ct的MIC，再用次抑菌浓度的药物诱导Ct的耐药，通过基因分析，探讨其耐药的产生机制。　　 资料与方法:　　 1.标本的收集与培养　　 临床株13株，标准株l株。用细胞培养法进行培养和传代。　　 2.药物敏感实验　　 2.1设置药物浓度(单位mg/L)。　　 2.2确定能引起90％以上细胞感染的Ct的接种量。　　 2.3最低抑菌浓度(MIC)测定。　　 3.次抑菌浓度诱导耐药　　 在生长培养液中加入1/2MIC浓度的红霉素、阿奇霉素和交沙霉素，进行Ct的接种与收集。连续传代，每四代测定MIC，当测得MIC≥4倍诱导前MIC，则诱导耐药成功。　　 4.耐药机制的研究方法　　 4.1 L4耐药机制的研究：制备基因组DNA，PCR扩增L4，测序。　　 4.22 3S rRNA耐药机制的研究：提取总RNA，逆转录制备cDNA，PCR扩增23SrRNA，测序。　　 结果:　　 1.MIC:经过对13株临床Ct标本的测定，证实红霉素、阿奇霉素及交沙霉素的MIC范围分别为：0.5～1mg/L，0.5～1mg/L，0.04～0.16mg/L。　　 2.13株临床标本均成功诱导了对大环内酯类的耐药性。　　 3.基因分析显示，L4的临床株和标准株均有相同的突变，其突变与大环内酯类药物耐药无关。23SrRNA有A2059G、A2057G、T2611C、A2093T位点的突变，与耐药性有关，而所产生的A2131T和C2452A位点突变可能为无义突变。没有诱导出在细菌中常见的A2058突变。　　 结论:　　 1.就目前来说，大环内酯类抗生素对Ct依然是敏感的。　　 2.可以用次抑菌浓度的大环内酯类抗生素在体外诱导Ct的耐药性。　　 3.诱导耐药株中，23S rRNA的突变有A2059G、A2057G、T2611C、A2093T，其中以2611位点突变为常见。虽然也可以产生A2131T和C2452A突变，但这两个位点的突变可能与耐药性无关。诱导中，也可以使L4发生突变，但与耐药性无关。