论文部分内容阅读
目的:铁死亡(ferroptosis)是由铁依赖性脂质过氧化导致细胞程序性死亡。糖脂毒性诱导胰岛β细胞损伤是2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的重要病理特征。葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)被证实对糖脂毒性诱导的细胞具有保护作用,Nrf2已被证明对铁死亡反应具有保护作用,本研究旨在从铁死亡角度观察高糖高脂条件下胰岛β细胞的形态学和生化学的变化,以期进一步探究高糖高脂诱导细胞损伤的的发病机制,并探究GSPE对高糖高脂诱导胰岛β细胞损伤的保护作用机制。方法:分别用高糖(25 mmol/L葡萄糖),高脂(200μmol/L棕榈酸钠),高糖高脂(25 mmol/L葡萄糖和200μmol/L棕榈酸钠)联合干预处理MIN6细胞,检测细胞12 h、24 h、48 h活性,高糖高脂联合RSL3或DFO干预MIN6细胞,进一步用GSPE以及Nrf2 si RNA进行干预,评估了细胞活力,Lillie染色观察MIN6细胞内铁沉积情况,检测MDA、GSH、ROS,铁代谢指标(Tf R1、DMT1、ferritin)和铁死亡指标(GPX4、SLC7A11、ACSL4),Nrf2信号通路指标(Nrf2、HO-1、NQO1)。结果:1.CCK8的结果显示:与对照组相比,高糖高脂能够诱导MIN6细胞死亡,细胞存活率下降,呈现时间效应关系,与GP组相比,加入DFO后能够提高细胞存活率,RSL3进一步降低细胞的存活率,0、10、20和30 mg/L的GSPE能够提高细胞的存活率且对正常细胞无损伤作用。2.检测细胞内MDA、GSH和ROS的结果表明:与对照组相比,GP能够导致细胞MDA水平含量升高,ROS荧光强度增强,GSH水平降低,与GP组相比RSL3提高MDA的含量,提高ROS荧光强度,降低GSH的水平,GSPE和DFO降低MDA含量,ROS荧光强度,提高GSH水平。3.Lillie染色和铁代谢相关指标的结果显示:与对照组相比,GP能够导致细胞内铁沉积,与GP组相比RSL3上调Tf R1、DMT1、ferritin的蛋白水平,DFO和GSPE能够下调Tf R1、DMT1、ferritin的蛋白水平。4.铁死亡相关指标:与对照组相比,GP能够下调细胞内GPX4、SLC7A11的蛋白表达水平,与GP组相比RSL3下调GPX4、SLC7A11蛋白水平,提高ACSL4的蛋白水平,DFO和GSPE能够上调GPX4、SLC7A11,降低ACSL4的蛋白水平。5.细胞内胰岛素水平:与对照组相比,GP能够导致细胞胰岛素水平降低,与GP组相比,GSPE和DFO增加了细胞内的胰岛素水平。6.Nrf2信号通路相关指标:与对照组相比,GP能够上调Nrf2、HO-1和NQO1的蛋白表达水平,与GP组相比,结果发现GSPE均能上调Nrf2、HO-1和NQO1的表达水平。GSPE联合Nrf2si RNA干预后发现抑制Nrf2后会抑制GSPE的保护作用,抗氧化酶HO-1、NQO1、GPX4、SLC7A11的表达降低。结论:高糖高脂能够导致胰岛β细胞铁死亡,GSPE能够抑制细胞铁死亡;GSPE可能是通过激活Nrf2信号通路,上调抗氧化酶,减轻高糖高脂诱导的细胞铁死亡,从而提高细胞存活率,增加细胞的胰岛素水平,改善胰岛β细胞的功能。