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精原干细胞(Spermatogonial stem cells， SSCs)为雄性动物整个生命过程中的生精过程(spermatogenesis)提供了基础条件，它既能自我更新，又能产生既定分化命运的精原细胞，是雄性成体内唯一能将自身基因传递给下一代的干细胞。培养SSCs通常需要饲养层，如小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEFs)、STO细胞或者和Sertoli细胞共培养，并需要一系列的生长因子和营养因子，如胶质细胞源性神经营养因子(glialcell line-derived neurotrophic factor, GDNF)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growthfactor, bFGF)、上皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)以及白血病抑制因子(leukemiainhibitory factor, LIF)等。本实验尝试建立一种简便有效的精原干细胞分离培养及扩增的方法。在本实验中，从幼年小鼠、成年小鼠以及绵羊的睾丸中经过两步酶消化法分离精原干细胞，通过形态学筛选，在不同培养基中，分别以MEFs、去除间质细胞、纯化后的Sertoli细胞以及SEFs为饲养层培养，比较精原干细胞在不同培养体系的增殖效率，以获得稳定增殖的精原干细胞系。本研究发现成年小鼠精原干细胞在不添加GDNF等生长因子的情况下以Sertoli细胞为饲养层，能够与添加生长因子并以MEFs为饲养层的扩增效率相当。尤其是6日龄的小鼠使用此方法可以获得形成三维结构的致密克隆，绵羊(白萨福克)的精原干细胞亦同样适用于此法。此方法建系成功率高，保证细胞系的单一基因型，显著降低体外培养精原干细胞的成本。本实验为成体基因来源的转基因动物的制作和疾病模型的建立提供技术支持。