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目的:卵巢癌发病隐匿,多数患者确诊时已属晚期,其治疗方法主要是彻底的细胞减灭术和以顺铂和紫杉醇为基础的联合化疗,但远期疗效并不甚理想,耐药的发生是制约临床治疗的主要因素。近年来研究表明,白细胞介素6(Interleukin6,IL-6)在卵巢癌细胞中高表达,IL-6不仅在卵巢癌的发生、发展中起重要作用,而且还影响卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。目前关于IL-6在卵巢癌化疗耐药中的作用及作用机制尚不十分明确,本课题首先观察了IL-6的表达对卵巢癌细胞化疗耐药的影响,在此基础上对其作用机制及相关信号通路进行了初步探讨。方法:应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、免疫印迹(Western Blot)、逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和MTT法,对四种国际公认的人上皮性卵巢癌细胞系的IL-6及其受体(IL-6Rα、gp130)表达水平与其化疗敏感性及耐药相关基因和凋亡抑制基因表达水平进行分析。在此基础上,选择不分泌IL-6但表达其受体,对顺铂和紫杉醇敏感的A2780细胞和高表达IL-6及其受体,对顺铂和紫杉醇耐药的SKOV3细胞为研究模型:(1)分别应用MTT法和RT-PCR技术观察外源性IL-6是否影响A2780细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性及对耐药相关基因和凋亡抑制基因表达的作用;(2)采用脂质体法将含正义(sense,ss)或反义(antisense,as)IL-6 cDNA的表达载体分别转染至A2780和SKOV3细胞,应用G418筛选出阳性克隆,并通过ELISA法进行鉴定。采用上述同样方法对稳定表达ss/asIL-6的细胞克隆进行顺铂和紫杉醇敏感性及耐药相关基因和凋亡抑制基因表达的检测;(3)应用特异性信号阻断剂PD98059(MEK1/2抑制剂)和Wortmannin(PI3K抑制剂),分别观察其对外源性IL-6或内源性过表达IL-6诱导卵巢癌细胞化疗耐药的阻断作用。结果:(1)四种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6,其转录水平与蛋白水平基本一致,且都表达IL-6受体(IL-6Rα、gp130);(2)四种卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,ES-2细胞次之,CAOV-3和SKOV-3细胞则有不同程度的耐药;(3)部分耐药相关基因和凋亡抑制基因在A2780和ES-2细胞中的表达水平均较低,而在CAOV-3和SKOV-3细胞中的表达水平均较高。(4)外源性IL-6可显著降低A2780细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并能以剂量依赖的方式上调耐药基因MDR1、GST-π和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL、XIAP的表达;(5)筛选出IL-6低、中、高表达的A2780克隆,分别命名为A2780/ssIL-6L、A2780/ssIL-6M、A2780/ssIL-6H,和IL-6中、高抑制表达的SKOV3克隆,分别命名为SKOV3/asIL-6MI、SKOV3/asIL-6HI,及相应的空载体pcDNA3.1(+)/A2780和pcDNA3.1(+)/SKOV3克隆;(6)与空载体pcDNA3.1(+)/A2780和未转染的A2780细胞相比,ssIL-6基因转染组细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性明显降低,上述耐药相关基因和凋亡抑制基因的表达水平则明显升高;(7)与空载体pcDNA3.1(+)/SKOV3和未转染的SKOV3细胞相比,asIL-6基因转染组细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性显著增高,上述耐药相关基因和凋亡抑制基因的表达水平则明显降低;(8)特异性信号阻断剂PD98059和Wortmannin能以剂量依赖的方式分别阻断由外源性IL-6或内源性过表达IL-6诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药。结论:(1)卵巢癌细胞通过自分泌IL-6可诱导其对传统化疗药物顺铂和紫杉醇产生耐药性;(2) IL-6诱导卵巢癌细胞产生化疗耐药的作用可能与上调耐药相关基因MDR1、GST-π和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达相关;(3) IL-6至少通过活化Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt信号转导通路来诱导卵巢癌细胞产生化疗耐药。