论文部分内容阅读
本文以绿僵菌MA3为对象,研究了绿僵菌对椰心叶甲的致病性、椰心叶甲感染绿僵菌后的组织病理学变化、绿僵菌与椰心叶甲体液免疫及细胞免疫之间的相互作用以及绿僵菌侵染对椰心叶甲CYP4基因的诱导表达作用,旨在揭示绿僵菌对椰心叶甲的致病机理,明确绿僵菌与椰心叶甲的互作关系,为椰心叶甲综合治理中有效利用绿僵菌提供理论依据,同时也为寄主与病原物互作关系的研究提供新的例证。以生物测定方法进行的室内研究表明表明绿僵菌MA3对椰心叶甲成虫及各龄幼虫均具有良好的致病作用。1×107孢子/mL是比较理想的浓度,接种后15天的校正累计死亡率均达到或接近100%。温度和湿度对MA3的致病力有显著影响,在30℃的温度和接近饱和的湿度条件下MA3对椰心叶甲的致病力最强。对染病后的椰心叶甲幼虫进行的组织切片观察表明,绿僵菌对椰心叶甲幼虫的侵染主要通过体表途径完成,经气门侵入也可能是绿僵菌侵染椰心叶甲的途径之一。侵入血腔中的绿僵菌沿着脂肪体、肌肉、食道、气管、腺体等组织周围生长繁殖,随后相继侵入各组织中,被侵染的组织发生显著的病理变化。酚氧化酶原激活系统是昆虫重要的体液免疫系统之一,在抵御病原体的入侵、表皮硬化及伤口俞合等反应中均发挥着重要的作用。椰心叶甲在受到绿僵菌MA3侵染后出现明显的酚氧化酶活性上升,这有助于增强椰心叶甲对绿僵菌侵染的抵抗能力。但受侵染椰心叶甲接受昆布多糖注射后,酚氧化酶的活性水平要显著低于未受侵染椰心叶甲接受昆布多糖注射后的酶活性水平,表明绿僵菌在侵染过程中具有抑制酚氧化酶原激活系统的功能,以此克服椰心叶甲的免疫反应。通过光镜和透射电镜方法的观察,在椰心叶甲成虫血淋巴中发现五种结构不同的血细胞。绿僵菌侵染后,浆血细胞和类绛色细胞表现出明显的吞噬作用,同时各种类型血细胞的超微结构均发生显著改变,并最终导致细胞的坏死。血细胞总数在绿僵菌侵染后出现先升高后下降的变化,各种血细胞的所占比例也与侵染前有较大改变。以CYP4的氨基酸保守序列设计简并引物,从椰心叶甲成虫克隆了5个cDNA片段,对其中片段BLWH4进行3’端序列克隆及半定量RT-PCR分析,序列分析表明其为CYP4基因片段。半定量RT-PCR分析结果证明绿僵菌侵染后BLWH4的表达增强,并持续5-7天,提示BLWH4可能具有增强椰心叶甲抵抗绿僵菌侵染的作用。