水貂阿留申病(Aleutian disease of mink,AD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian disease of mink virus,ADV)引起的以浆细胞增多为主要特征的慢性、消耗性、病毒性传染病。主要侵害水貂的免疫系统,导致机体免疫系统紊乱,死亡率极高,严重损害了水貂养殖产业的健康发展,该病存在于绝大多数养殖水貂的国家和地区。目前,能有效预防该病的疫苗尚未研制成功,该病的防治已成为水貂养殖领域的世界性难题,在防治方面主要采取检疫淘汰阳性貂的办法。本研究采用原核表达系统与胶体金免疫层析技术,针对ADV抗体快速检测试纸条技术进行了初步研究。应用生物软件分析截取实验室分离的ADV流行毒株ADV-DL125株基因VP2基因抗原表位区705 bp片段。设计特异性引物,对其进行PCR扩增。将PCR扩增产物与原核表达载体pET-28a(+)连接,获得原核表达载体pET-28a-VP2a。将其转入感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,可在大约28KD处获得特异性蛋白条带。经Co-NTA亲和层析法得到VP2a纯化蛋白,WesternBlot检测结果表明,pET-28a-VP2a蛋白能够与ADV阳性血清发生特异性反应。利用柠檬酸三钠还原法制备不同直径大小的胶体金颗粒,确定直径30 nm的胶体金颗粒用于标记蛋白。根据胶体金免疫层析的原理,本实验用胶体金标记纯化后的VP2a蛋白作为金标垫,纯化后的VP2a蛋白作为NC膜上检测线(T)的划线抗原,纯化的ADV阳性血清IgG作为NC膜上质控线(C)的划线抗体。通过优化各反应条件,确定金标蛋白最佳标记浓度为10μg/mL,最佳标记pH为8.69,T线抗原浓度为0.7 mg/mL,C线抗体浓度为0.9 mg/mL。试纸条特异性、敏感性、重复性和稳定性检测结果表明,本研究所研制的试纸条能与水貂ADV阳性血清发生特异性反应,与水貂犬瘟热、细小病毒性肠炎、圆环病毒阳性血清不反应,与对流免疫电泳的符合率可达92.9%。