青花菜和花椰菜DH系的创制

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青花菜(Brassica oleracea L.var.Italica)和花椰菜(Brassica oleracea L.var.botrytis)是芸薹属甘蓝种中两种以幼嫩花球为食用器官的高品质、高营养蔬菜。当前,市售主流青花菜和花椰菜杂交品种多依赖于进口,我国自主创新选育的品种较少,竞争力差。因此,选育具有自主知识产权的的高品质杂交种非常重要。然而,青花菜和花椰菜都是异花授粉作物,选育具有强杂种优势、性状优良的杂交种的前提是获得稳定的纯系,游离小孢子培养技术可以解决此问题。本研究以20个不同基因型的青花菜和6个不同基因型的花椰菜为材料,对其进行小孢子培养获得胚状体,然后对子叶形胚状体进行继代、成苗、生根培养,移栽成活后进行倍性鉴定,将青花菜材料鉴定出的双单倍体(doubled haploid,DH)植株进行自交繁殖、园艺学性状调查以及优异DH系的筛选,为青花菜育种工作提供材料,花椰菜材料经小孢子培养获得再生植株,经过倍性鉴定,获得双单倍体植株。结果如下:1.基因型在青花菜小孢子培养中是影响胚状体发生的主导因素之一。在20个试材中有10个试材成功获得了胚状体,其中‘B4’胚诱导率最高,为10.5胚/蕾;‘B8’胚诱导率最低,仅有0.33胚/蕾,前者比后者多10.17胚/蕾。在胚状体再生发育方面,10个基因型青花菜存在显著差异,‘B8’在10个基因型中成苗率居首位,为94.27%,‘B7’成苗率最低为57.24%,二者相差37.03%。不同基因型青花菜的胚发育畸形率有差异,最高的是‘B2’,为16.89%,比胚发育畸形率最低的‘B8’高出14.52%。青花菜再生植株的移栽成活率均达到80%以上,其中‘B6’移栽成活率为96.30%,在10个基因型中最高。通过游离小孢子培养获得了620株再生植株,共有335株双单倍体植株,平均双单倍体率为54.03%,其中最高为73.44%(B1)。对获得的DH系进行园艺学性状调查,‘Y5’和‘Y8’颜色蓝绿、花球紧实、花蕾大小一致、茎不中空,是综合性状最优的DH系。2.在6个不同基因型花椰菜的游离小孢子培养中,有4个基因型成功获得胚状体,4个基因型花椰菜产胚量差异显著,其中‘WB03’产胚量为9.67胚/蕾,‘WB01’仅获得球形胚状体,产胚量仅为0.16胚/蕾,前者单蕾产胚量是后者的60.43倍。试验表明,NLN培养基中加入活性炭的处理比未加入活性炭的处理对花椰菜胚胎发生的作用显著不同,后者未获得胚状体。此外,3个基因型花椰菜在成苗上存在差异,其中‘WB03’的成苗率最高,高达94.44%,‘WB04’成苗率最低,为73.20%,并且它的死亡率最高,为10.55%。‘WB02’胚发育畸形率最高,为24.85%,而‘WB03’花椰菜胚发育畸形率最低,仅为3.33%。对成苗的再生植株进行移栽,花椰菜移栽成活率都在80%以上,移栽成活率最高的是‘WB04’,为90.12%。对花椰菜的再生植株进行倍性检测,发现在306株再生植株中共有122株双单倍体植株,平均双单倍体率为39.45%。
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