第一部分雌性C57BL/6小鼠骨髓和卵巢中MVH蛋白表达模式分析　　目的：　　探索小鼠Vasa同源体（Mouse Vasa Homologue, MVH)蛋白在雌性小鼠体内的表达、分布特点，为有关Vasa基因的基础研究提供更多的证据，并为探索“肾主骨生髓”与“肾主生殖”的内在关联提供一定的研究基础。　　方法：　　采用Western Blot和免疫荧光技术，通过阳性对照与阴性对照，以确认MVH在C57BL/6雌性小鼠骨髓中是否有所表达；采用Western Blot技术，对不同年龄段、卵巢早衰（Premature ovarian failure，P0F)造模后不同天数、以及动情周期各个阶段的小鼠骨髓和卵巢中MVH蛋白的表达进行检测和分析。　　结果：　　1.本研究首次确认C57BL/6雌性小鼠骨髓组织M V H蛋白的阳性条带位于约60-65kDa处，并且在卵巢组织中可重复检测到两条M V H蛋白阳性条带，一个约80kDa，一个约55-60kDa，C57BL/6雌性小鼠的心脏、肌肉以及脊髓组织中并未检测到MVH阳性表达的产物。　　2. MVH蛋白在骨髓细胞中散在地表达在某些细胞的胞浆中，在卵巢中表达在所有非凋亡卵泡的卵母细胞胞浆中。　　3.与幼年组和成年组相比，老年组小鼠骨髓中MVH蛋白的表达升高（P<0.01)，POF模型小鼠在造模后第7天MVH蛋白的表达也明显升高（P<0.01)。　　4.卵巢中的MVH蛋白随着年龄的增长和P0F模型造模时间的延长而表达下降(P<0.01及P<0.05)。　　5.在小鼠动情周期的各个不同阶段，骨髓中MVH蛋白的表达比较稳定，各阶段的表达无统计学差异；卵巢中，M V H蛋白55-60kDa的条带呈现出一定的表达模式：在动情前期和动情期第二天表达较高，较高的MVH表达有伴随出现排卵前卵泡集聚的现象。　　结论：　　骨髓中，MVH蛋白在自然衰老小鼠和POF小鼠中表达升高，类似于干细胞老化的损伤性改变。卵巢中，MVH蛋白在动情前期和动情期第二天的较高表达，与卵母细胞重新进入减数分裂的获能过程可能相关，而在同一个动情周期阶段，其卵巢中表达水平与卵巢储备相关，为研究“肾主骨生髓”与“肾主生殖”的内在关联奠定了基础。　　第二部分补肾活血方对POF模型小鼠卵巢储备功能的疗效评估和机制研究　　目的：　　评估补肾、补肾活血方对POF模型小鼠的疗效，进一步挖掘中医“肾主骨生髓”与“肾主生殖”之间的内在关联，为补肾活血法则治疗POF及其机制提供依据。　　方法：　　以“肾主生殖”的中医经典理论为基础，结合临床实践的经验，选择补肾方和补肾活血方作为主要的干预措施。在疗效评估上，以始基卵泡计数作为卵巢储备功能的主要评估指标，以卵巢湿重、卵巢指数、动情周期、体重等作为协助评估指标。在确定疗效的基础上，采用Western Blot和Real-Time PCR技术，对各组小鼠骨髓、外周血、卵巢中的生殖细胞相关因子MVH的表达进行分析。　　结果：　　1.中药灌胃21天，与正常组相比，模型组始基卵泡数下降（P<0.05);与模型组相比，补肾组的始基卵泡数无统计学差异，而补肾活血组始基卵泡数虽然无统计学差异性，但是均值有升高的趋势。　　2.延长中药灌胃时间至28天，与正常组相比，模型组小鼠始基卵泡数下降更为明显（P<0.01)，且体重下降（P<0.05)，卵巢湿重显著下降（P<0.01)，卵巢指数下降（P<0.05)，动情周期明显延长（P<0.01)。与模型组相比，补肾活血组始基卵泡数升高（P<0.05)，体重升高（P<0.05)，动情周期天数缩短（P<0.05)。　　3.补肾活血方灌胃28天，与正常组相比，模型组小鼠骨髓和外周血中MVH的mRNA表达升高（P<0.05)，卵巢中的MVH的mRNA及蛋白表达水平均显著下降（P<0.01)；与模型组相比，补肾活血组小鼠骨髓中MVH mRNA表达下降（P<0.05)，卵巢中的MVH的mRNA及蛋白表达升高（P<0.05)。骨髓中的MVH蛋白表达各组之间无统计学差异。　　结论：　　补肾活血方对环磷酰胺引起的卵巢储备下降具有改善作用，其机制可能是通过补肾的“生髓、养血”的作用，修复环磷酰胺引起的骨髓干细胞功能损伤，并通过活血作用，加强了来自于骨髓的相关细胞向卵巢部位的募集与移行，促进卵母细胞的生成，从而改善POF小鼠的卵巢储备功能，为深入研究“肾主骨生髓”与“肾主生殖”之间的内在关联奠定了基础。