论文部分内容阅读
目的明确低剂量重金属锑暴露后,对前列腺癌进展产生的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT方法筛选锑暴露PC3细胞的亚致死剂量,并明确在该剂量下锑对PC3细胞增殖效应的影响;明确锑暴露影响细胞增殖最显著剂量后,用该剂量锑处理PC3细胞,分别通过细胞划痕实验、Transwell实验以及磷脂酰丝氨酸外翻法分析,研究锑暴露对细胞迁移能力、侵袭能力及凋亡能力的作用;采用基因转录组测序的方法,研究低剂量锑暴露PC3细胞后,基因异常表达情况;根据基因测序结果,分别采用RT-qPCR及Western Blot方法,研究低剂量锑暴露对CtBP2以及下游蛋白转录翻译水平的影响;通过比对CtBP2转录起始上游DNA序列,查询金属效应元件(MRE)结构,构建MRE表达质粒后转染HEK293T细胞,予以低剂量锑暴露后,进行双荧光素酶报告基因实验,证明MRE结构与低剂量锑暴露的关系;建立锑暴露裸鼠荷瘤实验模型后,明确低剂量锑对裸鼠及皮下肿瘤生长的影响,并记录裸鼠体重及皮下种植瘤体积变化,绘制生长曲线,采用Western Blot方法检测其肿瘤组织中CtBP2以及下游蛋白表达水平。结果低剂量锑暴露可促进PC3细胞增殖,并发现在锑暴露剂量为8uM时,其促进增殖效应最为显著(P<0.05);以8uM锑暴露PC3细胞后,细胞迁移以及侵袭能力均显著增加(P<0.05),但并不能增加其抗凋亡能力;根据基因转录组测序结果,低剂量锑暴露PC3细胞后,多种基因出现显著的差异性表达,其中包括CtBP2表达水平显著增加(P<0.05);根据RT-qPCR方法验证,低剂量锑暴露后PC3细胞中CtBP2 mRNA显著增加,结合Western Blot实验结果提示,CtBP2以及下游c-Myc、HSPC111蛋白表达水平显著增高(P<0.05);通过比对CtBP2 DNA序列,证明其转录起始上游具有金属效应元件(MRE)结构,因此CtBP2为MRE调控的效应基因;成功构建金属效应元件表达质粒后,双荧光素酶报告基因系统结果证明,低剂量锑可以与该结构发生相互作用,进一步促进下游CtBP2表达增加;建立低剂量锑暴露裸鼠荷瘤实验模型后,对照组与10mg/kg/d组裸鼠皮下种植瘤体积分别为(1344.9±882.8)mm3以及(2612.4±777.5)mm3,具有统计学差异(P<0.05),结果证实低剂量锑可显著促进裸鼠种植瘤生长;而通过Western Blot实验证明在低剂量锑暴露后的裸鼠肿瘤组织中,CtBP2以及下游c-Myc、HSPC111蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论低剂量锑暴露可显著影响前列腺癌细胞的生物学行为,促进前列腺癌进展。该作用机制是低剂量锑与金属效应元件(MRE)相互作用上调CtBP2表达,并通过调节CtBP2-c-Myc信号通路,发挥其促进肿瘤进展的作用。