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研究目的基于中药七情中“相须”、“相使”与“相畏”、“相杀”理论,探讨姜黄、姜黄素(curcumin)与丝裂霉素C(MMC)配伍运用对乳腺癌模型的作用效果及其作用机制。
研究方法①体内实验采用人乳腺癌MCF-7细胞异种移植瘤裸鼠模型,观察姜黄、curcumin与MMC配伍运用后实验动物食欲、体重及体内瘤体的变化;基因芯片(microarray)法筛选肿瘤组织中差异表达基因:ELISA、TUNEL法观察肿瘤组织的细胞凋亡;Western blot法观察肿瘤组织细胞增殖及凋亡相关蛋白的表达;比色法检测实验动物血清中AST/GOT、ALT/GPT、Cr、BUN的变化;骨组织病理切片观察实验动物骨髓生长状况;DNA cross-linking实验观察GRP58介导的DNA交联的变化;质谱检测实验动物肝肾组织中药物的分布情况。②体外实验采用人乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞模型。MTT法观察各浓度姜黄、curcumin、MMC及其配伍对MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖的影响;AO荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化;DNA ladder观察凋亡细胞的DNA断片化;流式细胞仪分析细胞周期及检测细胞凋亡率;Western blot法观察curcumin与MMC配伍运用对细胞周期及凋亡相关蛋白的表达、并探讨其对细胞增殖及凋亡相关信号传导通路的影响.
研究结果①Curcumin100mg/kg与MMC1.5mg/kg配伍运用提高了对人乳腺癌MCF-7细胞异种移植瘤裸鼠体内肿瘤生长的抑制效果,产生了协同抗肿瘤作用,其作用机制与诱导了肿瘤细胞凋亡有关.产生协同效应的配伍最低效应浓度(curcumin40μmol/L+MMC2.5μmol/L)增强了体外MCF-7细胞增殖抑制效果,其作用机制与配伍后增加了细胞凋亡及阻滞了细胞周期进程有关,并通过“p38MAPK-GRP58-p53”信号传导通路调控细胞增殖与凋亡。这种体内外协同抗癌即发挥了“相须”、“相使”配伍效应。②Curcumin100mg/kg与MMC1、1.5、2mg/kg配伍产生的“相畏”、“相杀”作用体现在curcumin100mg/kg减轻了单独运用MMC引起的毒副作用,其作用机制可能与配伍用药抑制了GRP58介导的DNA交联及减少了MMC原型药物在肾脏中的蓄积量有关。
结论在体内异种移植瘤裸鼠模型中,curcumin100mg/kg与MMC1.5mg/kg的配伍起到了增效减毒作用,即产生了“相须”、“相使”与“相畏”、“相杀”的配伍效应。在体外人乳腺癌MCF-7细胞模型中,curcumia40μmol/L与MMC2.5μmol/L配伍起到了协同抗癌作用,即产生了“相须”、“相使”的配伍效应。