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随着人类寿命的延长,围绝经期及绝经后妇女人口比重的增加,骨质疏松已成为影响老年人生活质量的一种全球性卫生保健问题,发病率在各国均有升高趋势。骨质疏松是由多种因素造成的骨吸收与骨形成之间的平衡失调而形成,即骨吸收>骨形成,因此成功的调节骨再建是药物治疗骨质疏松的关键。大量研究报道,间歇性皮下注射PTH能够刺激骨形成,而皮下持续给予PTH则抑制骨形成,此观点为临床应用PTH治疗骨质疏松提供重要的实验依据,但其机制仍不十分清楚。 成骨细胞为骨组织中唯一具有PTH受体的细胞,是PTH在骨组织中的作用靶点,其主要功能是促进骨形成,所以被认为是PTH刺激骨形成的功能细胞。本文旨在通过观察PTH对成骨细胞的作用过程,试图阐明小剂量间歇性给予PTH治疗骨质疏松的细胞学机制,为临床进一步合理使用PTH治疗骨质疏松提供实验依据。研究共分为两部分。 第一部分 hPTH(1-34)对原代培养成骨细胞功能影响 1.酶消化法原代培养成骨细胞,光镜追踪观察细胞形态及特异的ALP组织化学染色对所培养的细胞进行质量鉴定。发现原代培养细胞95%为成骨细胞,纯度较高,可以用于实验。 2.3H-TdR掺入实验:以24h为一循环观察hPTH(1-34)在每一循环开始作用不同时间,经历3次循环对成骨细胞增殖的影响。结果表明:10-8mol.L-1hPTH(1-34)在以24h为一循环的前12h给药循环3次时3H-TdR掺入较对照组增加32%,而10-1mol.L-1 hPTH(1-34)对3H-TdR掺入无影响。hPTH(1-34)72h持续作用组3H-TdR掺入与对照组相比无明显差异。加入PKA-Ⅰ后阻断10-8mol.L-1hPTH(1-34)作用12h引起3H-TdR掺入增加,而加入PKC-Ⅰ后部分阻断10-8mol.L-1hPTH(1-