论文部分内容阅读
目的:探究含WW域的氧化还原酶(WWOX)基因与不同恶化程度非小细胞肺癌组织和肺癌细胞的相关性、WWOX过表达/干扰对肺癌细胞侵袭性的影响、RUNX2在WWOX过表达/干扰肺癌细胞中的变化及RUNX2介导WWOX抑制肺癌细胞侵袭性的机制。方法:本研究选用临床非小细胞肺癌组织标本和多种不同恶化程度的肺癌细胞作为研究对象。应用脂质体法瞬时转染外源性WWOX和RUNX2过表达质粒;脂质体法介导小干扰RNA沉默WWOX和RUNX2表达;荧光实时定量PCR检测不同处理条件下的WWOX、RUNX2和MMP-9 mRNA的表达含量;免疫印迹法(western blot)检测WWOX和RUNX2蛋白的表达含量;Transwell小室检测肺癌细胞侵袭性和迁移性;划痕试验检测肺癌细胞迁移性的改变;免疫荧光检测肺癌细胞相关黏附因子如E-cadherin的表达情况及形态学观察。结果:临床组织样本实验表明,相较于肺癌旁正常组织,肺癌组织中WWOX的表达出现减少或缺失,且在高恶化组织(II期-III期肺癌)比低恶化组织(I期肺癌)中表达要减少。细胞实验表明,WWOX的表达量与肺癌细胞恶化程度成反比,在肺正常上皮细胞中表达最多。针对高侵袭性但WWOX低表达的H1299细胞株,转染WWOX过表达质粒后,其侵袭性和迁移性出现减弱,黏附性出现一定的上调,而再转染RUNX2过表达质粒后,其侵袭性出现回升;针对低侵袭性但WWOX高表达的NL9980细胞株,应用小干扰RNA沉默WWOX的表达后,其侵袭性和迁移性增强,黏附性下降,而再应用小干扰RNA沉默RUNX2表达后,其侵袭性出现回降。Western blot证实WWOX对RUNX2存在抑制作用,荧光实时定量PCR证实RUNX2下游因子MMP-9在WWOX过表达细胞中出现下调,而在WWOX沉默表达细胞中出现上调。结论:以上结果表明,WWOX与肺癌组织和肺癌细胞的侵袭性密切相关。RUNX2介导了WWOX对肺癌细胞侵袭性的抑制作用。