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邻苯二甲酸二甲酯(Dimethylphthalate,DMP),是邻苯二甲酸酯类化合物中的一种,主要作为增塑剂应用于食品包装、医疗设备、建筑装修材料以及家庭生活用品中。随着增塑剂的广泛使用,DMP被大量释放出来进入环境。环境中的DMP可通过呼吸或饮食等方式被人体吸收。研究发现:DMP对人体健康具有毒性作用,已被我国列为优先控制的环境污染物。 目前,国内外对DMP的检测方法主要有气相色谱(Gas chromatography,GC)、高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)和气相色谱-质谱(Gaschromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用技术,这些方法都能精确地检测出DMP的含量,但样品前期处理操作复杂、耗时长,需要高档的仪器设备,不便于现场检测。为方便测定DMP在环境中的污染水平,建立一种快速、简便、灵敏度高、低成本的方法检测环境和生活用品中DMP的含量具有重要的科学意义。 酶联免疫分析(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)具有操作简便快速、灵敏度高、不需昂贵的仪器设备、可在现场一次检测多个样本等优点,被认为是现场检测环境污染物的经典方法。 本研究采用重氮法将小分子化合物4-氨基邻苯二甲酸二甲酯(Dimethyl-4-aminophthalate,DMAP)与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和卵清蛋白(Ovalbumin, OVA)进行偶联合成人工抗原DMAP-BSA和DMAP-OVA。通过筛选,选用DMAP-BSA作为免疫原免疫Balb/c小鼠。6次免疫结束后,获得高效价和高灵敏度抗血清。采用杂交瘤技术融合免疫效果最佳小鼠的脾细胞和SP2/0细胞,通过ELISA法检测杂交瘤细胞阳性和对DMP的特异性,筛选出一株能稳定分泌DMP单克隆抗体细胞株DMP-2C11,夹心ELISA法检测出DMP-2C11细胞株分泌抗体的亚型是IgG2a。DMP-2C11细胞株扩大培养后,通过小鼠腹水法大量制备DMP的单克隆抗体,辛酸-硫酸铵法提纯腹水抗体,方阵滴定法确定最佳人工抗原包被浓度为0.5μg/mL,单抗最佳稀释倍数为4000。ELISA最适检测条件:5%脱脂奶粉作封闭剂、二抗反应温度为37℃,邻苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)作显色剂。建立的人工抗原包被的ELISA标准曲线y=19.68 Log(x)+20.71,相关系数R2为0.993,线性检测范围是0.92~1029.68μg/L,最低检测限(LD)即IC10为0.28μg/L,表明该DMP抗体可满足环境中DMP含量的检测。